PM2.5暴露干扰心肌细胞的分化作用及其机制研究

发布时间：2023-04-08 20:26

　　目的:研究PM_2.5有机提取物暴露对小鼠畸胎瘤干细胞P19心肌分化过程的干扰作用,旨在揭示PM_2.5有机提取物产生心肌分化毒性的机制。方法:1.MTT法筛选出PM_2.5无细胞毒性剂量MTT细胞毒性试验设置剂量梯度设置为0 mg/L,1 mg/L,10 mg/L,100mg/L,同时设置阳性对照组0.5%TritonX100,选择非细胞毒性的剂量进行后续研究。2.建立P19小鼠畸胎瘤干细胞体外心肌分化模型P19小鼠畸胎瘤干细胞体外心肌分化模型模拟体内胚胎心脏发育过程,整个过程分为四个时期:未分化时期、心肌中胚层时期、心肌祖细胞期、和成熟心肌期,1%DMSO悬浮培养诱导拟胚体形成后进行贴壁培养,分化过程共持续14天。3.未分化P19细胞暴露非细胞毒性剂量(10 mg/L)PM_2.5.5 48 h对分化进程的干扰作用显微镜下观察分化各时期形态学变化,实时荧光定量PCR技术检测不同分化时期特异性标志物的表达,免疫荧光及流式细胞术检测分化末期成熟心肌细胞功能性蛋白cTNT的表达情况,判断未分化时期暴露PM

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
abstract
引言
第一部分 PM_2.5对P19小鼠畸胎瘤干细胞心肌分化过程的影响
    (一)材料与方法
        1.材料
        2.方法
    (二)结果
        1.PM_2.5无细胞毒性剂量的确定
        2.P19小鼠畸胎瘤细胞心肌定向分化模型及分化不同时期形态学变化
        3.PM_2.5干扰心肌分化各阶段特异性标志物的表达
        4.PM_2.5抑制P19细胞分化为成熟心肌细胞
    (三)讨论
        1.PM_2.5成分的复杂性
        2.干扰干细胞分化效率的混杂因素
        3.体外干细胞模型研究PM_2.5心肌发育毒性结果外推至人的不确定性
        4.实验结果的局限性
第二部分 PM_2.5对未分化期P19细胞的毒性作用机制研究
    (一)材料与方法
        1.材料
        2.方法
    (二)结果
        1.AHR信号通路的激活和WNT信号通路的抑制
        2.PM_2.5引起细胞形态学变化
        3.PM_2.5致细胞遗传损伤
        4.PM_2.5致细胞凋亡作用
        5.PM_2.5抑制细胞增殖
        6.PM_2.5阻滞细胞周期
    (三)讨论
        1.AHR信号通路、WNT信号通路与干细胞特性维持之间的关系
        2.细胞遗传损伤与细胞凋亡之间的关系
        3.细胞周期与细胞增殖的关系
        4.细胞周期与遗传损伤及细胞凋亡之间的关系
        5.AHR信号通路和WNT信号通路改变
        6.本部分结果总结
实验结果图解
结论和展望
参考文献
综述
    参考文献
中英文缩写词表
研究生期间科研经历和发表的文章
致谢



本文编号：3786419