基于cAMP/PKA/SF-1信号转导介导的戊唑醇对斑马鱼生殖内分泌干扰作用机制初探
发布时间：2023-11-05 09:30
化学农药在保护农业生产、提高产量等方面发挥着重要作用。但是,最近半个世纪,越来越多的农药被证实可能存在环境内分泌干扰效应。它们通过干扰生物体正常激素调节,引起机体内神经系统、分泌系统、免疫系统产生诸如雄性退化,雌雄同体,种群退化等问题。戊唑醇(Tebuconazole)是一种广谱、高效的内吸性三唑类杀菌剂,其低毒高效的特点使其被全世界广泛使用。随着戊唑醇杀菌剂的广泛使用,其对我国生态环境的影响应引起高度重视。相关研究已表明戊唑醇会对斑马鱼造成生殖内分泌干扰效应,但其具体干扰机制尚未清楚。因此,本课题拟展开戊唑醇对cAMP/PKA/SF-1信号转导干扰机制的相关研究。(1)为筛选戊唑醇体外实验具体暴露时间及暴露浓度,首先选择0-72h间11个时间点,通过细胞计数法,选择人源H295R细胞生长对数生长期的时期,确定戊唑醇暴露时间为48 h。同时通过MTS试剂盒及ATP试剂盒,检测0.1 mg/L-50 mg/L范围戊唑醇暴露48 h后H295R细胞的活力。MTS及ATP结果表明,在20mg/L浓度下,细胞活力为对照80%左右。最终选择48h,戊唑醇暴露浓度为20 mg/L作为后续体外实验暴...
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
术语和缩略语表
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 环境内分泌干扰物概述
1.1.1 环境内分泌干扰物定义
1.1.2 环境内分泌干扰物分类
1.1.3 环境内分泌干扰物作用及危害
1.2 环境内分泌干扰物对HPG轴干扰作用机制研究
1.3 戊唑醇的应用现状及毒理学研究进展
1.3.1 戊唑醇应用现状
1.3.2 戊唑醇毒理学研究进展
1.4 cAMP/PKA/SF-1信号转导机制研究进展
1.4.1 蛋白质磷酸化研究进展
1.4.2 cAMP/PKA/SF-1信号转导机制研究进展
1.5 本研究设计
1.5.1 目的及意义
1.5.2 主要研究内容
1.5.3 技术路线
1.6 课题来源
第二章 戊唑醇对H295R细胞全基因组水平基因表达影响
2.1 实验材料
2.2.1 供试药剂
2.2.2 主要仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 戊唑醇对人H295R细胞暴露时间及浓度筛选
2.2.2 H295R细胞暴露及取样
2.2.3 转录组分析
2.3 结果与分析
2.3.1 戊唑醇对人H295R细胞生长抑制
2.3.2 测序数据质量评估
2.3.3 差异基因表达分析
2.3.4 差异基因表达聚类分析
2.3.5 差异表达基因GO分析
2.3.6 差异表达基因KEGG注释与富集分析
2.4 小结
第三章 戊唑醇对PKA的活性抑制效应
3.1 实验材料
3.1.1 供试药剂
3.1.2 主要仪器设备
3.2 实验方法
3.2.1 细胞培养
3.2.2 斑马鱼胚胎培养
3.2.3 人H295R细胞、YAK1基因缺失型人H295R细胞及斑马鱼胚胎中PKA活性测定
3.2.4 人H295R细胞及YAK1基因缺失型人H295R细胞中SF-1通路相关基因表达水平测定
3.2.5 人H295R细胞、YAK1基因缺失型人H295R细胞及斑马鱼胚胎中PKA磷酸化功能
3.2.6 数据整理及分析评估
3.3 结果与分析
3.3.1 YAK-1基因缺失型人H295R细胞验证
3.3.2 戊唑醇对PKA的磷酸化功能影响
3.3.3 戊唑醇对PKA磷酸化功能的影响
3.3.4 戊唑醇对人H295R细胞SF-1通路相关基因表达量影响
3.3.5 戊唑醇对人AYAK1 H295R细胞SF-1通路相关基因表达量影响
3.4 小结
第四章 戊唑醇对PKA的活性抑制机制
4.1 实验材料
4.1.1 供试药剂
4.1.2 主要仪器设备
4.2 实验方法
4.2.1 TEB与PKA-Cα亚基的结合试验
4.3 结果与分析
4.3.1 TEB与PKA-Cα亚基的结合试验
4.4 小结
全文总结
总结
论文创新点
不足与展望
参考文献
作者简历及读研期间取得的科研成果
本文编号：3860766
【文章页数】：93 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
致谢
术语和缩略语表
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 环境内分泌干扰物概述
1.1.1 环境内分泌干扰物定义
1.1.2 环境内分泌干扰物分类
1.1.3 环境内分泌干扰物作用及危害
1.2 环境内分泌干扰物对HPG轴干扰作用机制研究
1.3 戊唑醇的应用现状及毒理学研究进展
1.3.1 戊唑醇应用现状
1.3.2 戊唑醇毒理学研究进展
1.4 cAMP/PKA/SF-1信号转导机制研究进展
1.4.1 蛋白质磷酸化研究进展
1.4.2 cAMP/PKA/SF-1信号转导机制研究进展
1.5 本研究设计
1.5.1 目的及意义
1.5.2 主要研究内容
1.5.3 技术路线
1.6 课题来源
第二章 戊唑醇对H295R细胞全基因组水平基因表达影响
2.1 实验材料
2.2.1 供试药剂
2.2.2 主要仪器设备
2.2 实验方法
2.2.1 戊唑醇对人H295R细胞暴露时间及浓度筛选
2.2.2 H295R细胞暴露及取样
2.2.3 转录组分析
2.3 结果与分析
2.3.1 戊唑醇对人H295R细胞生长抑制
2.3.2 测序数据质量评估
2.3.3 差异基因表达分析
2.3.4 差异基因表达聚类分析
2.3.5 差异表达基因GO分析
2.3.6 差异表达基因KEGG注释与富集分析
2.4 小结
第三章 戊唑醇对PKA的活性抑制效应
3.1 实验材料
3.1.1 供试药剂
3.1.2 主要仪器设备
3.2 实验方法
3.2.1 细胞培养
3.2.2 斑马鱼胚胎培养
3.2.3 人H295R细胞、YAK1基因缺失型人H295R细胞及斑马鱼胚胎中PKA活性测定
3.2.4 人H295R细胞及YAK1基因缺失型人H295R细胞中SF-1通路相关基因表达水平测定
3.2.5 人H295R细胞、YAK1基因缺失型人H295R细胞及斑马鱼胚胎中PKA磷酸化功能
3.2.6 数据整理及分析评估
3.3 结果与分析
3.3.1 YAK-1基因缺失型人H295R细胞验证
3.3.2 戊唑醇对PKA的磷酸化功能影响
3.3.3 戊唑醇对PKA磷酸化功能的影响
3.3.4 戊唑醇对人H295R细胞SF-1通路相关基因表达量影响
3.3.5 戊唑醇对人AYAK1 H295R细胞SF-1通路相关基因表达量影响
3.4 小结
第四章 戊唑醇对PKA的活性抑制机制
4.1 实验材料
4.1.1 供试药剂
4.1.2 主要仪器设备
4.2 实验方法
4.2.1 TEB与PKA-Cα亚基的结合试验
4.3 结果与分析
4.3.1 TEB与PKA-Cα亚基的结合试验
4.4 小结
全文总结
总结
论文创新点
不足与展望
参考文献
作者简历及读研期间取得的科研成果
本文编号：3860766
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/huanjinggongchenglunwen/3860766.html
