白鲢CYP2K基因cDNA克隆及微囊藻毒素对其表达的影响

发布时间：2024-03-02 19:43

　　微囊藻毒素（microcystin, MC）是淡水水体中一类常见的蓝藻肝毒素，主要由铜绿微囊藻产生。近年来由于蓝藻水华的频繁爆发，MC的危害受到越来越多的重视。白鲢（Hypophthalmichthys molitrix）作为我国一种重要的淡水养殖鱼类，在发生蓝藻水华的水体中经常受到MC的暴露，但已有研究表明，白鲢对MC却具有极强的耐受能力。CYP450是动物肝脏最重要的I相解毒酶类，在鱼类中也普遍存在。本研究为了探讨白鲢CYP2K基因的表达情况是否与MC的休克相关，进行了如下实验：（1）根据其他鱼类中CYP2K基因的保守序列设计简并引物，采用PCR方法，在白鲢肝脏中克隆CYP2K基因cDNA的编码序列；（2）利用荧光定量PCR (qPCR)技术，检测CYP2K基因在白鲢肝脏、肾脏、脾脏、心脏、脑、肠及肌肉中的表达情况；（3）用孙瑞元氏改进的寇氏法设计急性毒性试验，求得了MC腹腔注射白鲢24h的LD50；（4）以24h LD50及其1/2浓度的MC腹腔注射白鲢，注射6h后，取肝脏制作组织切片，检测了受MC急性暴露的白鲢肝组织的损伤情况；（5）用24h LD50的1/5及1/10浓度的M...

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【部分图文】：

图1-1微囊藻毒素MC-LR的结构

MC的致毒机理是通过与蛋白磷酸酶(proteinphosphatas丝氨酸/苏氨酸残基结合,抑制其活性[122],从而诱发细胞骨架蛋白高度磷使哺乳动物肝细胞凋亡或坏死,使肝脏充血肿大、动物失血休克死亡[123]由于蛋白磷酸酶的活性受到抑制,这样就相对激活了蛋白激酶,....

图2-1简并引物

图2-1简并引物Fig.2-1DegeneratePrimer（2）总RNA提取提取RNA所用的离心管和枪头均用0.1%的DEPC水浸泡过夜n高压蒸汽灭菌两次，待用；玻璃匀浆器121℃，20min高压蒸烘烤6h，待用；所用氯仿及异丙醇均为新开封的试剂....

图2-2胶回收图解

图2-2胶回收图解Fig.2-2Thediagramofgelextractio行琼脂糖凝胶电泳，利用Qu2-1所示。

图3-1白鲢肝脏总RNAFig.3-1.ThetolalRNAinthehepatopancreasofsilvercarp

3结果与分析检测结果总RNA，用1%琼脂糖凝胶电泳检NA的18S和28S条带清晰，在值的比值在1.8~2.0之间，表明段PCR扩增的模板。

本文编号：3917301