嗜热菌Thermaerobacter subterraneun磷酸三酯酶在大肠杆菌BL21中的异源表达与性质表征

发布时间：2024-03-16 19:16

　　有机磷农药因环境污染和食药残留问题严重威胁着人们的身心健康,这使有机磷农药降解酶的研发迫在眉睫。降解有机磷农药的主要酶类是磷酸三酯酶,因其成本低、快速解毒而引起人们的广泛关注,而来源于嗜热菌中的酶类以其稳定性好、活力高而备受青睐。本试验从嗜热菌Thermaerobacter subterranean BAA137中调取磷酸三酯酶基因(PTE),构建重组质粒pET-28a-PTE,经转化诱导在大肠杆菌BL21中高效表达。通过组氨酸镍柱分离纯化、SDS-PAGE和Western-blot鉴定,得到目标蛋白,并进行酶学性质表征。(1)对嗜热菌Thermaerobacter subterranean BAA137进行复壮培养,结果表明:2%接种量、60℃静置培养24h为嗜热菌最适生长条件,这极大缩短了嗜热菌的生长周期。(2)以嗜热菌TS基因为模板,PCR扩增出磷酸三酯酶基因,构建重组质粒pET-28a(+),测序结果表明磷酸三酯酶基因克隆成功。(3)对重组酶进行性质表征,结果显示:重组磷酸三酯酶是别构酶,V_max为101.81U/mg,Hill系数n为0.8,显示负协同效...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图3.1嗜热菌培养结果

3结果与分析robactersubterraneanBAA137的培养方法进行复苏，选择用胰5℃，60℃和65℃。虽然温度的降0℃培养嗜热菌的产量与65℃相同按照体积比在2%时，嗜热菌在2时间过长，反之，细胞培养速度加养条件温度较高平板容易失水快，点，且选择用斜面培....

图3.4重组质粒的构建Fig.3.4Constructionofrecombinantplasmid

M-Marker；1-重组质粒图3.4重组质粒的构建Fig.3.4ConstructionofrecombinantplasmidM-Marker；1-PCR产物图3.5PCR鉴定Fig.3.5PCRidentification粒构建电泳结果可以知道，重....

图3.5PCR鉴定Fig.3.5PCRidentification

23M-Marker；1-PCR产物图3.5PCR鉴定Fig.3.5PCRidentification建电泳结果可以知道，重组质。由图3.5PCR鉴定结果可知，基因成功，测序结果也表明重纯化液体培养基，37℃振荡培养至度1mM，30℃过夜培养。诱导超声波破....

图3.7磷酸三酯酶最适温度Fig.3.7Theoptimaltemperatureofphosphotriesterase

M-Marker；1-菌液电泳；2-SDS-PAGE电泳；3-蛋白免疫印迹图3.6蛋白电泳图Fig.3.6Proteinelectrophoresis的酶学性质表征和pH量的条件下测定30-90℃的酶活力，观察温度对酶活性为100%，平行测定三次取平均值，如图3....

本文编号：3929986