氡致小鼠肺组织损伤及p53基因表达的改变

发布时间：2017-09-04 02:18

  本文关键词：氡致小鼠肺组织损伤及p53基因表达的改变

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【摘要】：目的:建立染氡小鼠模型,观察氡暴露对小鼠肺组织和线粒体的损伤,p53及其靶基因的表达改变,为阐明氡及其子体的损伤机制提供基础资料。方法:(1)染氡小鼠模型的建立:32只BALB/c小鼠随机分为4组,每组8只,分别为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。p53基因敲除的C57BL/6小鼠16只,雌雄各半,随机分为对照组和中剂量组,每组8只。染氡组小鼠置于多功能生态染氡室,染氡浓度为100000Bq/m3,低、中、高剂量组的累积照射剂量分别为30、60、120工作水平月。(2)小鼠肺组织病理损伤:小鼠达到暴露剂量后,处死取适量肺组织,4%多聚甲醛溶液固定,病理学常规制作HE染色切片,TUNEL法检测细胞凋亡。(3)采用WST-8法检测肺组织、外周血和线粒体中SOD活性,硫代巴比妥酸法(TBA)检测MDA含量。荧光定量PCR检测线粒体DNA拷贝数、p53及其靶基因PUMA的表达。Western blot检测p53及PUMA蛋白的表达。(4)采用spss21.0进行统计分析,数据以均数±标准差(x±s)表示,p0.05为差异有统计学意义。结果:(1)小鼠肺组织病理学观察发现:氡染毒后的小鼠肺组织出现肺泡壁变薄、断裂、数个肺泡融合成大肺泡,高剂量组还出现了肺泡塌陷、出血等病理改变。小鼠肺组织细胞凋亡指数升高,线粒体DNA拷贝数增加。(2)染氡后小鼠肺组织、外周血和线粒体SOD活力下降,MDA含量升高。小鼠肺组织细胞中p53及其靶基因PUMA的基因表达和蛋白表达均上调。结论:1、氡致小鼠的肺损伤效应包括病理改变、氧化损伤、凋亡指数上升和线粒体DNA拷贝数增加。2、氡染毒后小鼠肺组织细胞中p53及其靶基因PUMA的表达升高,提示p53-PUMA通路参与了氡致肺损伤的效应。
【关键词】：氡 小鼠 肺损伤 p53 线粒体
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R14
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 引言9-11
• 第一部分 氡吸入致小鼠肺组织的损伤11-22
• 1.材料与方法11-16
• 1.1 试剂和仪器11-12
• 1.1.1 主要试剂11
• 1.1.2 主要仪器11
• 1.1.3 实验动物11-12
• 1.2 方法12-16
• 1.2.1 主要试剂配制12
• 1.2.2 氡及其子体吸入染毒动物模型的建立12
• 1.2.3 外周血的采集（摘除眼球取血）12
• 1.2.4 肺组织样品的制备12-13
• 1.2.5 HE染色13
• 1.2.6 小鼠肺组织SOD活性、MDA含量的测定13-16
• 1.2.7 小鼠外周血SOD活性、MDA含量的测定16
• 1.2.8 统计分析16
• 2 结果16-20
• 2.1 染氡小鼠肺组织病理改变16-17
• 2.2 氡染毒致BALB/c小鼠肺组织SOD活性和MDA含量的改变17-18
• 2.3 氡染毒致C57BL/6 小鼠外周血SOD活性和MDA含量的改变18-20
• 3 讨论20-22
• 第二部分 氡吸入致肺组织线粒体改变22-30
• 1 材料与方法22-25
• 1.1 材料22-23
• 1.1.1 主要试剂22
• 1.1.2 主要仪器22-23
• 1.2 实验方法23-25
• 1.2.1 小鼠肺组织线粒体的提取23
• 1.2.2 小鼠肺组织DNA的提取23-24
• 1.2.3 线粒体DNA拷贝数检测24-25
• 1.2.4 凋亡切片的制作25
• 1.2.5 统计分析25
• 2 结果25-28
• 2.1 肺组织细胞凋亡25-27
• 2.2 线粒体SOD活力、MDA含量变化27-28
• 2.3 线粒体DNA拷贝数变化28
• 3 讨论28-30
• 第三部分 氡吸入致小鼠p53基因及其 靶基因表达的改变30-40
• 1 材料与方法30-35
• 1.1 材料30-31
• 1.1.1 主要试剂30-31
• 1.1.2 主要仪器31
• 1.2 实验方法31-35
• 1.2.1 肺组织RNA的提取31-32
• 1.2.2 cDNA的制备32
• 1.2.3 荧光实时定量PCR检测目的基因的表达32-33
• 1.2.4western blot检测蛋白表达33-35
• 1.2.5 统计分析35
• 2.结果35-39
• 2.1 氡染毒小鼠p53和PUMA基因表达改变35-37
• 2.2 氡染毒小鼠p53和PUMA蛋白表达改变37-39
• 3.讨论39-40
• 结论40-41
• 参考文献41-46
• 综述46-52
• 参考文献49-52
• 研究生期间科研经历及发表的文章52-53
• 中英文缩略语对照表53-54
• 致谢54-55

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本文编号：788761