黄刺玫果中总黄酮纯化工艺及黄刺玫果HPLC指纹图谱研究

发布时间：2017-10-20 02:13

  本文关键词：黄刺玫果中总黄酮纯化工艺及黄刺玫果HPLC指纹图谱研究

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【摘要】：目的:山西省野生刺玫资源非常丰富,是一种可持续开发利用、绿色环保、具有山西特色的优势资源。为全面控制黄刺玫的质量提供丰富的质量评价信息,本论文在黄刺玫果中总黄酮的提取工艺基础上,研究了黄刺玫果中总黄酮的最佳纯化工艺,并建立了黄刺玫果的HPLC指纹图谱,不仅为野生黄刺玫果中抗血栓活性成分的作用机理研究提供质量均一、稳定可控的供试样品,而且为黄刺玫果的进一步开发利用提供了实验依据。方法:在最佳提取工艺的基础上,本试验采用大孔吸附树脂法对黄刺玫果中总黄酮的纯化工艺进行了优化。选取了NKA-9、HPD100、FL-1、FL-2、FL-3、DM130、AB-8、D101八种大孔吸附树脂,考察不同类型的大孔吸附树脂对黄刺玫果中总黄酮的吸附和解吸性能,筛选树脂型号。对上样液浓度、最大上样量、洗脱剂的浓度及洗脱剂的用量进行考察得到最佳纯化工艺。建立黄刺玫果HPLC指纹图谱评价方法,分别考察了Thermo Syncronis C18色谱柱(4.6×150mm,5μm),Thermo Hypersil GOLD色谱柱(4.6×250mm,5μm),Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6×150mm,5μm),Inertsil ODS-SP色谱柱(4.6×250mm,5μm),Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6×250mm,5μm),Thermo BDS HYPERSIL C18色谱柱(4.6×250mm,5μm)6种色谱柱,甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.2%磷酸、甲醇-0.2%甲酸、乙腈-0.2%磷酸、甲醇-乙腈-0.2%磷酸6种流动相洗脱系统,不同柱温以及不同波长,优化了梯度洗脱程序,通过考察供试品溶液的提取方式、提取溶剂及提取时间,得到供试品溶液的最佳制备方法。结果:静态吸附和解吸试验结果表明D101型大孔树脂吸附解吸性能均较好,最佳工艺条件为:上样液料液比为1:12,最大上样量为2.6g生药/g树脂,3BV的70%乙醇洗脱,解吸率达95%,总黄酮回收率为72%。试验结果表明D101大孔树脂对黄刺玫果总黄酮具有很好的富集能力,建立的方法稳定、可靠,为规模化生产提供了基础。黄刺玫果HPLC指纹图谱条件为:色谱柱:Inertsil ODS-SP色谱柱(4.6×250mm,5μm);流动相:甲醇-乙腈-0.1%磷酸水溶液;流速:1.0 mL/min;柱温:25℃;检测波长:254nm;进样量:10μL;运行时间:80min。供试品处理方法:刺玫果10.0 g,20倍量50%乙醇,回流提取120min,趁热抽滤,60℃减压浓缩至干,50mL甲醇超声溶解,取上清液0.22μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。方法学考察结果:稳定性、精密度、重现性的相对保留时间和相对峰面积RSD分别在1%和3%以下,均符合中药指纹图谱的要求。结论:本课题在乙醇提取法优化黄刺玫果中总黄酮提取工艺的基础上,采用大孔吸附树脂法优化了总黄酮的纯化工艺,并建立了指纹图谱质量评价方法,为黄刺玫果质量标准的建立奠定了基础。对不同产地收集的黄刺玫果图谱进行相似度评价和聚类分析,了解化学成分差异,为原料的选择提供参考,具有理论意义和实用价值。
【关键词】：黄刺玫果 大孔树脂 总黄酮 高效液相色谱法 指纹图谱
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R284;O657.72
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 第一部分 黄刺玫总黄酮的纯化工艺研究13-24
• 1 材料与方法13-17
• 1.1 仪器与试药13-14
• 1.2 黄刺玫果中总黄酮提取工艺14
• 1.3 样品的测定方法14-15
• 1.4 大孔树脂的筛选15
• 1.5 纯化工艺参数的考察15-17
• 2 结果17-22
• 2.1 标准曲线的绘制17-18
• 2.2 大孔树脂的筛选18
• 2.3 上样液浓度的选择18-19
• 2.4 最大上样量考察19-20
• 2.5 洗脱液浓度20-21
• 2.6 洗脱终点的确定21
• 2.7 工艺验证21-22
• 3 讨论22-23
• 3.1 大孔树脂的筛选22
• 3.2 黄刺玫果中总黄酮的纯化工艺22-23
• 4 结论23-24
• 4.1 大孔树脂的筛选23
• 4.2 黄刺玫果中总黄酮的纯化工艺23-24
• 第二部分 黄刺玫果指纹图谱研究24-54
• 1 材料与方法24-47
• 1.1 仪器与试药24-25
• 1.2 色谱条件的考察25-37
• 1.3 供试品制备方法37-44
• 1.4 方法学考察44-47
• 2 结果47-52
• 2.1 成分峰的指认及参照峰的确认47-48
• 2.2 相似度计算48-50
• 2.3 聚类分析50-52
• 3 讨论52-53
• 3.1 洗脱系统的选择52
• 3.2 指纹图谱的建立及分析52-53
• 4 结论53-54
• 4.1 供试品的制备方法53
• 4.2 黄刺玫果的HPLC色谱指纹图谱53-54
• 参考文献54-57
• 综述57-65
• 参考文献62-65
• 致谢65-66
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果66-67
• 个人简历67

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本文编号：1064653