乙酰胆碱酯酶酶源的筛

发布时间：2017-12-23 08:25

  本文关键词：乙酰胆碱酯酶酶源的筛选、提取及其特性研究　出处：《华南理工大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

  更多相关文章： 鸡脑 乙酰胆碱酯酶 双水相萃取 酶学特性 氨基甲酸酯类有毒成分

【摘要】：本论文旨在进行乙酰胆碱酯酶酶源的筛选,并对新酶源进行乙酰胆碱酯酶的提取及特性研究,主要包括以下几方面的内容:1、经植物及动物酶源筛选,以鸡脑作为新酶源,研究了鸡脑粗酶提取条件及最适反应体系,得最佳提取条件:料液比为1:4,以含0.5%TritonX-100的磷酸盐缓冲液(0.1mol/L,pH8.0)作为提取液;最适反应体系:缓冲液pH 8.0,37℃保温15min以及底物浓度5mg/mL。2、建立了PEG-1000/(NH_4)_2SO_4双水相体系萃取鸡脑乙酰胆碱酯酶。双水相萃取最佳条件:PEG-1000浓度为15.5%,(NH_4)_2SO_4浓度为14.9%,pH为6.3,粗酶浓度为14.9%;反萃取分离PEG-1000最佳条件:C_6H_5O_7Na_3缓冲液与上相体积比为8:1,pH5.0,即可得到纯化后的鸡脑乙酰胆碱酯酶。进一步比较了双水相萃取、硫酸铵分级盐析、DEAE-52离子交换层析及Sephadex-200凝胶层析四种方法分离纯化鸡脑乙酰胆碱酯酶的效果,表明双水相萃取方法不仅纯化倍数及回收率高,而且具有用时短、成本低的优点。3)、研究了鸡脑乙酰胆碱酯酶的酶学性质:等电点pI为5.15,Km为5.67×10~(-5mol/L,Vm为0.20×10~2mol/(min·L),在40℃以下具有良好的热稳定性,在pH5~9缓冲液环境下具有良好的pH稳定性。初步研究了鸡脑乙酰胆碱酯酶对6种氨基甲酸酯类有毒成分(呋喃丹、灭多威、西维因、涕灭威、速灭威、氨基甲酸乙酯)的敏感性,并与鸡脑粗酶和家蝇乙酰胆碱酯酶进行了比较。发现氨基甲酸乙酯对三种酶均无抑制作用;鸡脑乙酰胆碱酯酶比鸡脑粗酶对有毒成分具有更高的敏感性;抑制动力学、半抑制浓度和双分子速率常数三种测定结果一致,均证明了鸡脑乙酰胆碱酯酶较家蝇乙酰胆碱酯酶具有更强的敏感性,更有利于低浓度氨基甲酸酯类有毒成分残留的检测。
【学位授予单位】：华南理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：O629.8;TS207.3

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本文编号：1323159