抗菌肽Mytichitin-A和Plantaricin ZJ5的重组表达纯化及活性鉴定

发布时间：2018-04-24 22:26

  本文选题：抗菌肽 + 大肠杆菌　； 参考：《天津科技大学》2016年硕士论文

【摘要】：抗菌肽Plantaricin ZJ5是2014年从传统发酵菜中分离得到的一种细菌素类抗菌肽,具有广谱抗菌性,由22个氨基酸组成,分子量为2572.9 Da。抗菌肽Mytichitin-A是2014年从厚壳贻贝的血清中分离得到的一种新型抗菌肽,由55个氨基酸组成,分子量为6621.55 Da,分子内有6个半胱氨酸,形成三对二硫键。在本研究中,将抗菌肽基因Plantaricin ZJ5和Mytichitin-A分别克隆到载体PGEX-2T和pMAL-c2x中,并转入大肠杆菌BL21中,在IPTG的诱导下分别与GST标签和MBP标签进行融合表达。并采用亲和纯化的方法得到了纯度较高的融合蛋白GST-PlantaricinZJ5 和 GST-Mytichitin-A,产量分别为 113 mg/L 和 84 mg/L。用肠激酶将亲和纯化后融合蛋白的标签去除得到无氨基酸残留的抗菌肽做抑菌圈实验。但是,抑菌实验的结果显示,大肠杆菌表达系统获得的抗菌肽Plantaricin ZJ5和Mytichitin-A均没有抑菌活性。之后,我们将抗菌肽基因Mytichitin-A克隆到外泌型表达载体pPICZαA上。通过电转化的方法,将SacI酶线性化的重组质粒pPICZαA-Mytichitin-A转入毕赤酵母GS115中。经甲醇诱导后目的蛋白存在于酵母发酵液上清中。经镍柱亲和纯化其产量为150mg/L。抑菌实验结果表明,重组表达抗菌肽Mytichitin-A对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)和枯草芽孢杆菌151-1均有明显的抑制作用,纯化后的重组抗菌肽对金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)有较强的抑制作用,最小抑制浓度(MIC)为31μg/mL。综上所述,我们的实验结果表明来源于厚壳贻贝血清中的抗菌肽Mytichitin-A能够在毕赤酵母中有效表达并分泌至胞外。这是抗菌肽Mytichitin-A首次通过基因工程的方法成功表达且具有抑菌活性,这为抗菌肽的应用提供了非常宝贵的实践经验。
[Abstract]:In this study , we cloned the antibacterial peptide gene , Plantaricin ZJ5 , and Mytidyl - A into Pichia pastoris GS115 . The results showed that the antibacterial peptide Mytidyl - A was successfully expressed in Pichia pastoris .

【学位授予单位】：天津科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：O629.72

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本文编号：1798532