HPLC测定小米中非法添加姜黄素及不确定度分析
发布时间：2020-02-28 19:20
【摘要】：采用高效液相色谱法(HPLC)对小米中非法染色姜黄素进行定性定量测定,并对其不确定度进行分析。以乙腈-4%冰乙酸(45+55)为流动相,流速1.0 mL/min,经C18柱分析,检测波长425 nm。采用外标法定量,姜黄素在0.585μg/mL~4.88μg/mL范围内线性关系良好,相关系数r~2=0.999 9,平均回收率92%,检出限为0.08 mg/kg,整个试验的合成不确定度为1.937%,扩展不确定度为X=(7.15±0.29)mg/kg;k=2。本方法操作简单,重复性好,检出限低,可用于小米中姜黄素非法染色的测定。
【图文】：
10min，放置至室温，摇匀后，用0.45μm有机系滤膜过滤于棕色样品瓶中，待测。1.3.3色谱条件流动相：乙腈+4%冰乙酸=45+55；色谱柱：Agela，C184.6mm×250mm，5μm；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；检测波长：425nm；进样体积：10μL。1.4结果计算用外标法计算姜黄素的含量：X=C×V×1000m×1000式中：X为姜黄素的含量，mg/kg；C为由标准曲线得到样品溶液中姜黄素的浓度，μg/mL；m为样品的质量，g；V为甲醇加入体积，mL。2结果与讨论2.1色谱条件的选择2.1.1检测波长的选择姜黄素光谱图见图1。如图1所示，采用二极管阵列检测器在190nm~800nm波长下对姜黄素标准品溶液进行扫描，结果显示姜黄素在425nm处有最大吸收峰，为了使其灵敏度最佳，选择425nm为检测波长。2.1.2流动相的选择姜黄素具有两个羟基，羟基氢易解离，在流动相中加入一定量酸可以抑制姜黄素的解离，以改善其在C18柱中的保留及峰型。本试验比较了乙腈-水、乙腈-1%磷酸、乙腈-0.1%冰乙酸、乙腈-4%冰乙酸4个体系的流动相，结果表明，在乙腈-水、乙腈-1%磷酸、乙腈-0.1%冰乙酸流动相体系下，姜黄素目标峰都有不X=（7.15±0.29）mg/kg；k=2.Themethodwassample，reproducible，lowdetectionlimit，andcanbeusedtode－terminetheillegalstainingofcurcumininmillet.Keywords：highperformanceliquidchromatography（HPLC）；curcumin；millet；uncertainty181614121086420-2mAU200300600波长/nm400500425.07图1姜黄素光谱图Fig.1Spectrumofcurcumin李卓，等：HPLC测定小米中非法添加姜黄素及不确定度分析标准与检测170
同程度的拖尾现象，而以乙腈-4%冰乙酸体系为流动相，目标峰峰型对称效果好，故选择乙腈-4%冰乙酸为流动相。图2、图3为姜黄素标准品及样品溶液色谱图。2.1.3提取溶剂的选择姜黄素极性较小，不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、冰乙酸等试剂中[9]。本试验比较了甲醇、无水乙醇、乙酸乙酯、冰乙酸、70%冰乙酸5种提取溶剂，结果如图4。由图4可知，提取率由大至小依次为：甲醇＞冰醋酸＞无水乙醇＞乙酸乙酯＞70%冰醋酸，甲醇的提取率最高，故选择甲醇为提取溶剂。2.2方法学考察2.2.1标准曲线的绘制取1.3.1项下姜黄素系列标准工作溶液在本试验所选色谱条件下测定，以姜黄素质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为y=0.8907x-0.0294，相关系数为r2=0.9999，结果表明，姜黄素在0.585μg/mL~4.88μg/mL范围内具有良好的线性关系。2.2.2回收率与重复性取阴性小米样品，分别添加了3个水平浓度，每个水平添加3个平行，按照本试验的方法测定姜黄素质量浓度，加标回收率及其相对标准偏差见表1。由结果可以看出，该方法具有良好的准确性和精密度。2.2.3稳定性由于姜黄素分子结构中含有共轭双键，易在光与热作用下发生氧化降解[10]，故应将提取溶液过滤后贮存于棕色样品瓶中，在室温下放置0、3、6、12、24、48h进行测定，结果发现姜黄素在0~24h内比较稳定，，24h时后有小幅度下降，说明处理好的样品应尽快测定，不宜放置过久。2.2.4检出限与定量限在本试验所选色谱条件下，用空白样品溶液稀释姜黄素标准溶液至10倍信噪比、3倍信噪比，结果10S/N时姜黄素质量浓度为0.06μg/mL，3S/N时姜黄素质量浓度为0.02μg/mL，经计算，姜黄素定量限为28262422201816141210864
【图文】：
10min，放置至室温，摇匀后，用0.45μm有机系滤膜过滤于棕色样品瓶中，待测。1.3.3色谱条件流动相：乙腈+4%冰乙酸=45+55；色谱柱：Agela，C184.6mm×250mm，5μm；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；检测波长：425nm；进样体积：10μL。1.4结果计算用外标法计算姜黄素的含量：X=C×V×1000m×1000式中：X为姜黄素的含量，mg/kg；C为由标准曲线得到样品溶液中姜黄素的浓度，μg/mL；m为样品的质量，g；V为甲醇加入体积，mL。2结果与讨论2.1色谱条件的选择2.1.1检测波长的选择姜黄素光谱图见图1。如图1所示，采用二极管阵列检测器在190nm~800nm波长下对姜黄素标准品溶液进行扫描，结果显示姜黄素在425nm处有最大吸收峰，为了使其灵敏度最佳，选择425nm为检测波长。2.1.2流动相的选择姜黄素具有两个羟基，羟基氢易解离，在流动相中加入一定量酸可以抑制姜黄素的解离，以改善其在C18柱中的保留及峰型。本试验比较了乙腈-水、乙腈-1%磷酸、乙腈-0.1%冰乙酸、乙腈-4%冰乙酸4个体系的流动相，结果表明，在乙腈-水、乙腈-1%磷酸、乙腈-0.1%冰乙酸流动相体系下，姜黄素目标峰都有不X=（7.15±0.29）mg/kg；k=2.Themethodwassample，reproducible，lowdetectionlimit，andcanbeusedtode－terminetheillegalstainingofcurcumininmillet.Keywords：highperformanceliquidchromatography（HPLC）；curcumin；millet；uncertainty181614121086420-2mAU200300600波长/nm400500425.07图1姜黄素光谱图Fig.1Spectrumofcurcumin李卓，等：HPLC测定小米中非法添加姜黄素及不确定度分析标准与检测170
同程度的拖尾现象，而以乙腈-4%冰乙酸体系为流动相，目标峰峰型对称效果好，故选择乙腈-4%冰乙酸为流动相。图2、图3为姜黄素标准品及样品溶液色谱图。2.1.3提取溶剂的选择姜黄素极性较小，不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、冰乙酸等试剂中[9]。本试验比较了甲醇、无水乙醇、乙酸乙酯、冰乙酸、70%冰乙酸5种提取溶剂，结果如图4。由图4可知，提取率由大至小依次为：甲醇＞冰醋酸＞无水乙醇＞乙酸乙酯＞70%冰醋酸，甲醇的提取率最高，故选择甲醇为提取溶剂。2.2方法学考察2.2.1标准曲线的绘制取1.3.1项下姜黄素系列标准工作溶液在本试验所选色谱条件下测定，以姜黄素质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为y=0.8907x-0.0294，相关系数为r2=0.9999，结果表明，姜黄素在0.585μg/mL~4.88μg/mL范围内具有良好的线性关系。2.2.2回收率与重复性取阴性小米样品，分别添加了3个水平浓度，每个水平添加3个平行，按照本试验的方法测定姜黄素质量浓度，加标回收率及其相对标准偏差见表1。由结果可以看出，该方法具有良好的准确性和精密度。2.2.3稳定性由于姜黄素分子结构中含有共轭双键，易在光与热作用下发生氧化降解[10]，故应将提取溶液过滤后贮存于棕色样品瓶中，在室温下放置0、3、6、12、24、48h进行测定，结果发现姜黄素在0~24h内比较稳定，，24h时后有小幅度下降，说明处理好的样品应尽快测定，不宜放置过久。2.2.4检出限与定量限在本试验所选色谱条件下，用空白样品溶液稀释姜黄素标准溶液至10倍信噪比、3倍信噪比，结果10S/N时姜黄素质量浓度为0.06μg/mL，3S/N时姜黄素质量浓度为0.02μg/mL，经计算，姜黄素定量限为28262422201816141210864
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本文编号：2583546
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