pH调控的非盐依赖疏水色谱方法建立及应用

发布时间：2020-03-26 02:17

【摘要】：层析分离在生物工程下游技术中占有重要地位,如何提高层析分离的有效性和经济性是本领域的研究重点。理论上讲,依据蛋白分子表面电荷、分子大小及亲疏水性的不同,色谱方法的正交组合可以为蛋白质分离提供通用的技术平台。然而近些年来,疏水色谱并没有在蛋白质分离过程中承担重要角色,这主要是由于经典疏水色谱高盐上样、低盐洗脱的模式会带来一系列问题。本论文针对疏水色谱的高盐问题,发展了一种pH调控的疏水色谱方法。该方法通过提高配基的疏水性及偶联密度,可实现非盐依赖的蛋白质吸附和洗脱。本论文的研究内容包括以下几个方面:pH调控的疏水色谱方法:为增加疏水层析介质的吸附选择性,由提高配基的疏水性出发,以1-萘乙酸作为新型疏水配基合成吸附剂,考察了溶液条件和材料性质对溶菌酶吸附的影响,经过密度优化,可实现低盐条件下的pH依赖型吸附,中等密度吸附介质在pH 10条件下对溶菌酶吸附量可达28.5 mg/mL,而p H 5.0条件下吸附量仅为0.8mg/mL;通过琼脂糖凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,1-萘乙酸功能化吸附介质对复杂样品中溶菌酶具有较好的分离效果,经pH 5.0的磷酸缓冲液(0.01 mol/L)洗脱,溶菌酶纯度可高达90%以上,回收率可达80%左右。pH调控的疏水色谱方法应用扩展:进一步探究了1-萘乙酸功能化吸附剂吸附抗体时溶液条件和材料性质的影响,同样可实现低盐条件下的p H依赖型吸附,中等密度吸附介质在中性条件下对人抗体的吸附量可达34.3 mg/mL。1-萘乙酸功能化吸附介质对复杂体系中抗体也具有较好的分离效果,p H优化结果显示,牛免疫球蛋白G(bIgG)的最佳上样pH为7.0,洗脱pH为3.5;上样量优化结果显示,bIgG的最佳上样量为胶血比1:1上样;一步纯化后抗体纯度可达90%以上,回收率达70%以上;该吸附介质经酸碱浸泡后仍能保持稳定性;五次使用过后抗体吸附量仍可达30 mg/m L。本论文的研究结果表明,基于1-萘乙酸功能化疏水层析介质的p H调控的疏水色谱模式能够实现蛋清溶菌酶及牛血清抗体的高效分离,为疏水层析配基的设计筛选与疏水色谱的应用提供了新的方向。
【学位授予单位】：大连理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：O652.6

【参考文献】

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本文编号：2600800