一种新型手性氨基酸探针D-BPBr的研究及其应用

发布时间：2021-02-26 02:16

　　氨基酸是一种重要的小分子手性代谢物,其含量变化通常与生命体的生理活动与疾病有着密切关系。近年来的一些研究表明,某些D构型氨基酸的含量在生命体处于疾病状态下时均表现出显著的变化。由于其在体内含量处于痕量水平,因此在复杂生物样本中对D构型氨基酸进行准确的定量分析颇具有挑战性。本论文基于课题组前期的研究基础,设计了一个带有溴同位素的手性醛探针D-BPBr,并结合高效液相色谱-质谱技术开展了一系列针对手性氨基酸和伯胺类化合物的分析研究。具体内容包括以下三个部分:1.制备了新型手性醛探针D-BPBr,该探针可对14对手性氨基酸进行标记,并基于高效液相色谱-质谱技术在C18色谱柱上对衍生产物实现良好的分离分析,且该色谱分离度（Rs）可达1.14至8.83。同时,探针D-BPBr具有良好的手性识别能力,可以在相同条件下可令D构型氨基酸具有更强的质谱响应,且其对于D构型氨基酸的手性识别值（Cs）达1.31至12.87。该方法可对23个氨基酸进行定量分析,并成功实现复杂生物基质尿液和血浆中对手性氨基酸的检出和定量。2.采用探针D-BPBr对55例健康人和52例胃癌病人的尿液样品中手性氨基酸进行靶向分析。... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【部分图文】：

Wang设计的一对手性醛探针的结构[35]

浙江大学硕士学位论文2一种手性醛探针对蛋白氨基酸的定量分析22时间的色谱峰，分别对应79Br和81Br标记的衍生产物，同时没有观察到明显的干扰峰，表明该Br-同位素探针标记方法不仅简化了探针的数量，而且在区分手性氨基酸方面具有良好的特异性。同时，两个离子通道中的色谱峰由于其强度几乎相同，都可以用于定量分析，且另外一个通道可以用于定性判断以排除假阳性信号。总结而言，使用新设计的探针D-BPBr，可以更好地鉴定和定量复杂手性氨基酸，产物中溴同位素的一个离子对通道用于定量分析，且可以用另一个通道排除假阳性信号。图2.4探针D-BPBr标记的Trp在负离子模式下79Br通道(586->218)和81Br通道(588->218)MRM图。第一个峰是L-Trp衍生产物，第二个峰是D-Trp衍生产物。2.3.2反应效率反应效率以检测加入探针反应后氨基酸剩余量与相同条件下未加入探针(乙腈补足探针溶液体积)氨基酸量计算得，计算公式2-1如下：反应效率=1-反应后氨基酸剩余量/未反应时氨基酸总量(2-1)衍生效率计算结果如表2.2所示，对于同一氨基酸，探针D-BPBr对其D构型氨基酸衍生效率高于其L构型氨基酸。其中，L构型氨基酸的衍生效率为0.69-0.96，D构型氨基酸的衍生效率为0.87-0.99，总体上探针D-BPBr对手性氨基酸的衍生效率较高，可以很好地对其进行衍生分析。

浙江大学硕士学位论文2一种手性醛探针对蛋白氨基酸的定量分析24有较强碱性侧链的氨基酸(Lys)、某些酸性侧链的氨基酸(Glu，Asp)和带有活性基团的氨基酸(Cys)。图2.514对D-BPBr标记的手性氨基酸和Gly在反相C18HPLC分离的MRM色谱图。对于每对手性氨基酸衍生产物，第一个峰是标记的L构型氨基酸产物，第二个峰是指相应D构型氨基酸产物。Leu和Ile的产物峰在图中进行了标记。此外，探针D-BPBr也显示出对D构型氨基酸更强的手性选择性，可在质谱分析中表现出更强的质谱信号。我们配制了相同浓度的D型和L型氨基酸标准品，并计算衍生后的D构型氨基酸产物与L构型氨基酸产物的峰面积之比，测量了这14个氨基酸对映体对的手性选择性(Cs)值。结果显示，探针B-BPBr对这14对手性氨基酸的Cs值在1.31至12.87之间（表2.3），表明该探针具有良好的手性选择性。探针D-BPBr对侧链具有碱性芳香族的D构型氨基酸（如His和

【参考文献】：
期刊论文
[1]柱前衍生化液相色谱法测定牛血清中游离氨基酸含量[J]. 贾鹏禹,孙蕊,寇芳,李文杰,修建成,武瑞.  中国生物制品学杂志. 2018(08)
[2]丹磺酰氯柱前衍生发芽糙米中γ-氨基丁酸的HPLC分析[J]. 周婷,程威威,林亲录,吴跃,丁玉琴,王晓映.  食品科技. 2014(01)



本文编号：3051921