莲子心生物碱与丹酚酸B提取分离及其与生物大分子相互作用的研究

发布时间：2017-04-14 22:15

  本文关键词：莲子心生物碱与丹酚酸B提取分离及其与生物大分子相互作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本论文利用高速逆流色谱法对几种天然活性物质进行了分离纯化，并采用多种光谱法(荧光光谱法、同步荧光光谱法、圆二色谱法、紫外光谱法)相结合的手段，研究了小分子与生物大分子血清白蛋白的相互作用。本论文分为四章，各章内容概述如下。 1、引用大量的国内外文献。介绍了蛋白质的结构与功能，天然产物活性成分的提取、分析和分离纯化的方法。概述了小分子与生物大分子血清白蛋白的相互作用的研究方法、研究内容和研究意义等，并提出了本论文的选题思想。 2、具体阐述了几种天然活性小分子的提取、分析以及分离纯化的方法和步骤。通过实验得到了莲子心中三种生物碱的pH区带高速逆流色谱分离体系，n-己烷-乙酸乙酯-甲醇-水=5:5:2:8(v/v)，上相有机相加10mmol/L的TEA作为固定相，下相水相加入5mmol/L的HCl作为流动相；丹参中丹酚酸B的pH区带高速逆流色谱分离体系，叔丁基甲醚：水＝1：1(v/v)，上层有机相加10mmol/L三氟乙酸作为固定相，下层水相加10mmol/L氨水，作为流动相。分离得到四种高纯度的单体物质(莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱和丹酚酸B)，并对其结构进行了鉴定，为以后的实验提供物质基础。 3、利用多光谱法(荧光光谱法、紫外光谱法、同步荧光光谱法)对莲子心中三种双苄基异喹啉生物碱(莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用进行了研究。通过计算得到各生物碱-BSA结合体系的结合常数(K)，结合位点数(n)，结合距离(r)以及热力学常数H0， S0和G0；同步荧光光谱反映了生物碱使BSA的构象发生了变化。实验结果表明：莲心碱和甲基莲心碱与BSA的结合作用力主要为范德华力和氢键；而异莲心碱与BSA的结合主要作用力类型为静电引力。根据综合表征参数Y值以及三种生物碱的结构式比较表明，生物碱与BSA的结合反应的反应强度依次为莲心碱甲基莲心碱异莲心碱。 4、在模拟生理条件下，采用荧光光谱法、同步荧光光谱法、圆二色谱法和紫外光谱法相结合的方法对丹参中丹酚酸B与BSA的相互作用进行了研究。通过计算得到各丹酚酸B-BSA结合体系的结合常数(K)，，结合位点数(n)，结合距离(r)以及热力学常数H0， S0和G0；同步荧光光谱和圆二色谱结果表明丹酚酸B的存在使BSA得构象发生了改变。实验结果表明：静态猝灭和非辐射能量转移导致了BSA的荧光猝灭；丹酚酸B-BSA体系是一个自发的过程，静电作用力是两者结合的主要作用力类型。此外，常见的金属离子Cu2+和K+的加入使得该体系的结合常数减小。 5、研究不同干燥方法(微波、鼓风干燥、阴干)对金银花的抗氧化活性和总酚、总黄酮含量的影响。利用鲁米诺化学发光体系，以抗坏血酸为阳性对照，以超氧阴离子(O2-)清除、双氧水(H2O2)清除和羟基自由基(HO)清除为指标，评价3种不同干燥方法对金银花的抗氧化活性的影响，并对总酚和总黄酮的质量分数进行了测定。实验结果表明：金银花具有较强的抗氧化活性；不同的干燥方法对其活性物质的含量以及抗氧化活性的强度均有较强的影响，其中70C微波干燥10min条件下，金银花总酚和总黄酮的含量最高，分别为30.402.75mg/g、61.247.62mg/g，并且其抗氧化活性最强，三种指标的IC50分别为金银花原提取液浓度的9.44%、0.029%、0.12%。而自然阴干4天的条件下，金银花的总酚和总黄酮的含量最低，分别为10.220.81mg/g、17.502.28mg/g，并且抗氧化活性最弱，三种指标的IC50分别为金银花原提取液浓度的11.97%、0.53%、0.37%。
【关键词】：相互作用 小分子 牛血清白蛋白 荧光猝灭
【学位授予单位】：山东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：O657.3;R284.2
【目录】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 第一章 综述12-28
• 1. 引言12
• 2. 血清白蛋白的结构和功能12-15
• 2.1 血清白蛋白的结构12-14
• 2.2 血清白蛋白的功能14-15
• 3. 天然产物的提取、分析和分离纯化方法15-17
• 3.1 天然产物的提取方法15-16
• 3.2 天然产物的分析方法16
• 3.3 天然产物的分离纯化方法16-17
• 4. 莲子心生物碱及丹酚酸 B 的药理作用17-18
• 5. 小分子物质与血清白蛋白的相互作用18-28
• 5.1 研究方法的进展18-22
• 5.2 研究参数22-26
• 5.3 研究目的、意义及论文研究内容26-28
• 第二章 丹酚酸 B 和莲子心中三种双苄基异喹啉生物碱提取制备28-37
• 1. 引言28-29
• 2. 材料与仪器29-30
• 2.1 实验材料与试剂29
• 2.2 仪器设备29-30
• 3. 实验方法30-31
• 3.1 样品的制备30
• 3.2 两相溶剂系统的配制30
• 3.3 分配系数(K)的测定30
• 3.4 高速逆流色谱分离30-31
• 3.5 HPLC 检测条件31
• 4. 讨论31-35
• 4.1 pH 区带逆流色谱分离条件的优化31-34
• 4.2 莲子心生物碱的鉴定34-35
• 4.3 丹酚酸 B 的鉴定35
• 5. 结论35-37
• 第三章 莲子心中三种双苄基异喹啉生物碱与牛血清白蛋白相互作用的光谱法研究37-44
• 1. 引言37
• 2. 实验部分37-38
• 2.1 仪器与试剂37
• 2.2 实验方法37-38
• 3. 结果与讨论38-43
• 3.1 三种生物碱对 BSA 的荧光猝灭机理38-39
• 3.2 结合常数 K 和结合位点数 n 的计算39-40
• 3.3 结合距离 r 的计算40
• 3.4 作用力类型的确定40-41
• 3.5 生物碱对 BSA 的构象的影响41-42
• 3.6 生物碱-BSA 反应体系的特性42-43
• 4. 结论43-44
• 第四章 丹参中丹酚酸 B 与牛血清白蛋白的相互作用的光谱法研究44-52
• 1. 引言44
• 2 实验部分44-45
• 2.1 材料与仪器44
• 2.2 实验方法44-45
• 3 结果与讨论45-51
• 3.1 丹酚酸 B 与 BSA 相互作用的荧光猝灭机理45-47
• 3.2 结合常数 K 和结合位点数 n 的计算47-48
• 3.3 结合距离 r 的计算48
• 3.4 作用力类型的确定48-49
• 3.5 丹酚酸 B 对 BSA 构象的影响49-50
• 3.6 金属离子对丹酚酸 B-BSA 体系的影响50-51
• 4. 结论51-52
• 第五章 化学发光法检测不同干燥方法对金银花抗氧化活性和化学成分的影响52-60
• 1. 引言52
• 2. 仪器与材料52-53
• 3. 实验方法53-56
• 3.1 金银花的干燥和提取53
• 3.2 金银花提取液化学成分的测定53-54
• 3.3 金银花提取液抗氧化活性实验54-55
• 3.4 数据统计与分析55-56
• 4. 结果与讨论56-58
• 4.1 不同干燥方法处理的金银花提取液中总酚、总黄酮含量56
• 4.2 金银花提取物对 O2-的清除作用56-57
• 4.3 金银花提取物对 H2O2的清除作用57-58
• 4.4 金银花提取物对 HO 的清除作用58
• 5. 结论58-60
• 第六章 结论60-62
• 致谢62-63
• 参考文献63-69
• 攻读学位期间发表文章情况69

【参考文献】

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