两株药用红树来源内生真菌次级代谢产物及其生物活性研究
发布时间：2021-07-31 07:33
木果楝（Xylocarpus granatum Koenig）为楝科木果楝属乔木或灌木,是红树林主要树种之一,分布于印度、越南、中国和马来西亚沿海地带,在我国只有海南省有生长。木果楝作为民间药物,主要用来治疗痢疾、霍乱、发热以及用作抗虫剂。国内外学者对木果楝化学成分进行了系统的研究,而木果楝内生真菌相关研究报道较少,为了进一步开发和利用濒危木果楝资源,本文以木果楝内生真菌作为研究对象,期望从中得到结构新颖、活性显著的先导化合物。本论文以两株海南药用红树林来源的内生真菌Talaromyces flavus TGGP35和Phomopsis sp.MGF222为研究对象,综合运用现代色谱分离方法和鉴定技术从其次级代谢产物中分离并鉴定了57个单体化合物的结构。从T.flavus TGGP35中分离得到42个单体化合物（1-42）:11个异香豆素类化合物（1-11）,3个混元萜类化合物（12-14）,5个内酯类化合物（15-19）,4个甾酮类化合物（20-23）,7个苯类衍生物（24-30）,7个含氮类化合物（31-37）,5个其它类化合物（38-42）;其中1和2为新化合物。从Phomops...
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：98 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
菌株TGGP35（左）与菌株MGF222（右）的形态特征
海南大学硕士学位论文2.3木果楝来源内生真菌T.flavusTGGP35次级代谢产物研究2.3.1菌株发酵菌株T.flavusTGGP35经过活化后，接种到液体培养基（300mL/1000mL）中以获得种子培养液，恒温（28℃）震荡培养72h。采用大米海盐固体培养基进行发酵培养（每个三角瓶中含大米60mL、65mL海水、1.3g葡萄糖、200mL蒸馏水）。高温灭菌后，在紫外灭菌30min的超净工作台上，使用移液枪将5mL种子液分别加入到培养基中，室温静置发酵培养25天。图2-2菌株TGGP35发酵产物HPLC指纹图谱Fig.2-2HPLCfingerprintoffermentationproductfromT.flavusTGGP352.3.2菌株发酵产物的提取与分离将真菌T.flavusTGGP35发酵得到的菌丝体用乙酸乙酯（浸没即可）进行浸泡三次，每次72小时，将萃取物进行浓缩合并，称量得到180g总浸膏。将浸膏与100-200目的正向硅胶(约为浸膏质量的2倍)混合充分碾磨，以石油醚-乙酸乙酯(VPE:VEtOAc=100:0-0:100）和乙酸乙酯-甲醇（VEtOAc:VMeOH=100:0-0:100）为洗脱剂，洗脱剂以2极性从小到大的梯度进行减压柱层析，经TLC点板后合并得到9个组分(Fr.1-Fr.9)。Fr.4经过正向硅胶柱，经TLC点板合并得到4个组分Fr.4.1-Fr.4.4。Fr.4.1经ODS梯度洗脱得到Fr.4.1.1和Fr.4.1.2，Fr.4.1.1经HPLC(VMeOH:VH2O=75:25,流速:2mL/min)纯化得到化合物22(12.1mg)和29(15.4mg)，Fr.4.1.2经HPLC(VCN:VH2O=72:28)纯化得到化合物39(5.2mg)；Fr.4.2经ODS梯度洗脱得到Fr.4.2.1和Fr.4.2.2，Fr.4.2.1经HPLC(VMeOH:VH2O=69:31)得到化合物23(2.9mg)，Fr.4.2.2经HPLC(VMeOH:VH2O=65:35)纯化得到化合物3(6mg),16(9mg),25(3mg),42(3.4mg)；Fr.4.313
海南大学硕士学位论文图2-9菌株MGF222发酵产物HPLC指纹图谱Fig.2-9HPLCfingerprintoffermentationproductfromPhomopsissp.MGF2222.4.2菌株发酵产物的提取与分离将真菌Phomopsissp.MGF222发酵得到的菌丝体用乙酸乙酯（具体步骤见2.3.2节）称量得到10.2g总浸膏。真菌Phomopsissp.MGF222经过减压柱层析，经TLC点板合并共得到7个组分(Fr.1-Fr.7)（具体操作步骤见2.3.2节）。分离流程图见下页：47
【参考文献】：
期刊论文
[1]1株红树来源真菌Daldinia eschscholtzii HJ001的活性次级代谢产物研究[J]. 梅荣清,李灿,王斌,黄国雷,易继凌,陈光英,郑彩娟. 中国海洋药物. 2019(06)
[2]一株红树来源真菌Penicillium citrinum HL-5126中两个新异香豆素化合物（英文）[J]. 梅荣清,黄国雷,王斌,白猛,罗由萍,陈光英,郑彩娟. 有机化学. 2019(05)
[3]中国南海海绵Cinachyrella sp.的化学成分研究[J]. 季宇彬,郑婷,尹姣定. 中国海洋药物. 2018(02)
[4]白花丹参根的酚酸类成分研究[J]. 张愉,朱海林,孙隆儒. 中药材. 2017(04)
[5]恒山黄芪内生真菌Aspergillus sp.中环二肽的分离和鉴定[J]. 张弘弛,李慧,安志鹏,周凤,刘瑞. 中国实验方剂学杂志. 2017(12)
[6]干姜化学成分研究[J]. 孙凤娇,李振麟,钱士辉,濮社班. 中国野生植物资源. 2016(05)
[7]红树尖瓣海莲内生真菌Phomopsis longicolla HL-2232次级代谢产物研究[J]. 宋鑫明,周学明,李小宝,郑彩娟,黄国雷,余章昕,宋小平,陈光英. 有机化学. 2015(10)
[8]八角莲内生真菌Penicillium sp.的杂萜和丁内酯类化学成分研究（英文）[J]. 李军伟,段瑞刚,邹建华,陈日道,陈晓光,戴均贵. 药学学报. 2014(06)
[9]多裂碎米荠内生真菌隐孢丛赤壳菌C2代谢产物研究[J]. 张昌飞,任晓光,赵春安,刘亚君,李海燕,魏大巧. 生命科学研究. 2013(01)
[10]铁包金中一个新的色原酮衍生物(英文)[J]. 沈玉霞,滕红丽,杨光忠,梅之南,陈小龙. 药学学报. 2010(09)
本文编号：3313052
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：98 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
菌株TGGP35（左）与菌株MGF222（右）的形态特征
海南大学硕士学位论文2.3木果楝来源内生真菌T.flavusTGGP35次级代谢产物研究2.3.1菌株发酵菌株T.flavusTGGP35经过活化后，接种到液体培养基（300mL/1000mL）中以获得种子培养液，恒温（28℃）震荡培养72h。采用大米海盐固体培养基进行发酵培养（每个三角瓶中含大米60mL、65mL海水、1.3g葡萄糖、200mL蒸馏水）。高温灭菌后，在紫外灭菌30min的超净工作台上，使用移液枪将5mL种子液分别加入到培养基中，室温静置发酵培养25天。图2-2菌株TGGP35发酵产物HPLC指纹图谱Fig.2-2HPLCfingerprintoffermentationproductfromT.flavusTGGP352.3.2菌株发酵产物的提取与分离将真菌T.flavusTGGP35发酵得到的菌丝体用乙酸乙酯（浸没即可）进行浸泡三次，每次72小时，将萃取物进行浓缩合并，称量得到180g总浸膏。将浸膏与100-200目的正向硅胶(约为浸膏质量的2倍)混合充分碾磨，以石油醚-乙酸乙酯(VPE:VEtOAc=100:0-0:100）和乙酸乙酯-甲醇（VEtOAc:VMeOH=100:0-0:100）为洗脱剂，洗脱剂以2极性从小到大的梯度进行减压柱层析，经TLC点板后合并得到9个组分(Fr.1-Fr.9)。Fr.4经过正向硅胶柱，经TLC点板合并得到4个组分Fr.4.1-Fr.4.4。Fr.4.1经ODS梯度洗脱得到Fr.4.1.1和Fr.4.1.2，Fr.4.1.1经HPLC(VMeOH:VH2O=75:25,流速:2mL/min)纯化得到化合物22(12.1mg)和29(15.4mg)，Fr.4.1.2经HPLC(VCN:VH2O=72:28)纯化得到化合物39(5.2mg)；Fr.4.2经ODS梯度洗脱得到Fr.4.2.1和Fr.4.2.2，Fr.4.2.1经HPLC(VMeOH:VH2O=69:31)得到化合物23(2.9mg)，Fr.4.2.2经HPLC(VMeOH:VH2O=65:35)纯化得到化合物3(6mg),16(9mg),25(3mg),42(3.4mg)；Fr.4.313
海南大学硕士学位论文图2-9菌株MGF222发酵产物HPLC指纹图谱Fig.2-9HPLCfingerprintoffermentationproductfromPhomopsissp.MGF2222.4.2菌株发酵产物的提取与分离将真菌Phomopsissp.MGF222发酵得到的菌丝体用乙酸乙酯（具体步骤见2.3.2节）称量得到10.2g总浸膏。真菌Phomopsissp.MGF222经过减压柱层析，经TLC点板合并共得到7个组分(Fr.1-Fr.7)（具体操作步骤见2.3.2节）。分离流程图见下页：47
【参考文献】：
期刊论文
[1]1株红树来源真菌Daldinia eschscholtzii HJ001的活性次级代谢产物研究[J]. 梅荣清,李灿,王斌,黄国雷,易继凌,陈光英,郑彩娟. 中国海洋药物. 2019(06)
[2]一株红树来源真菌Penicillium citrinum HL-5126中两个新异香豆素化合物（英文）[J]. 梅荣清,黄国雷,王斌,白猛,罗由萍,陈光英,郑彩娟. 有机化学. 2019(05)
[3]中国南海海绵Cinachyrella sp.的化学成分研究[J]. 季宇彬,郑婷,尹姣定. 中国海洋药物. 2018(02)
[4]白花丹参根的酚酸类成分研究[J]. 张愉,朱海林,孙隆儒. 中药材. 2017(04)
[5]恒山黄芪内生真菌Aspergillus sp.中环二肽的分离和鉴定[J]. 张弘弛,李慧,安志鹏,周凤,刘瑞. 中国实验方剂学杂志. 2017(12)
[6]干姜化学成分研究[J]. 孙凤娇,李振麟,钱士辉,濮社班. 中国野生植物资源. 2016(05)
[7]红树尖瓣海莲内生真菌Phomopsis longicolla HL-2232次级代谢产物研究[J]. 宋鑫明,周学明,李小宝,郑彩娟,黄国雷,余章昕,宋小平,陈光英. 有机化学. 2015(10)
[8]八角莲内生真菌Penicillium sp.的杂萜和丁内酯类化学成分研究（英文）[J]. 李军伟,段瑞刚,邹建华,陈日道,陈晓光,戴均贵. 药学学报. 2014(06)
[9]多裂碎米荠内生真菌隐孢丛赤壳菌C2代谢产物研究[J]. 张昌飞,任晓光,赵春安,刘亚君,李海燕,魏大巧. 生命科学研究. 2013(01)
[10]铁包金中一个新的色原酮衍生物(英文)[J]. 沈玉霞,滕红丽,杨光忠,梅之南,陈小龙. 药学学报. 2010(09)
本文编号：3313052
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