含二硫键的蛋白质/多肽的MALDI-TOF MS源内裂解研究

发布时间：2021-08-08 09:01

　　应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）法研究含二硫键的人胰岛素与甘精胰岛素酶解液的源内裂解（ISD）。比较了不同基质种类及不同结晶状态对含二硫键的人胰岛素与甘精胰岛素酶解液的源内裂解的影响。结果表明,含二硫键的蛋白质的ISD发生受激光点照射位置的影响,在不同基质与结晶形态的条件下,含二硫键的蛋白质的ISD碎片信息不同。通过分析比较,含二硫键的蛋白质的ISD较容易控制,并且其基质的种类及结晶状态作用很关键。需要获得大量碎片时,使激光照射在样品和阿魏酸（FA）基质形成的大结晶处;不希望出现碎片时,可使用2,4,6-三羟基苯乙酮（THAP）为基质,或使激光照射在样品和其他基质形成的细小均匀结晶处。 

【文章来源】：质谱学报. 2017,38(03)北大核心EICSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

图１人胰岛素（ａ）和甘精胰岛素（ｂ）的结构式和相对分子质量Ｆｉｇ．１Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｓｏｆｈｕｍａｎｉｎｓｕｌｉｎ（ａ）ａｎｄｉｎｓｕｌｉｎｇｌａｒｇｉｎｅ（ｂ）

注：左图为以ＦＡ为基质的经胰蛋白酶酶解后人胰岛素的位点照片图２均匀结晶位置（ａ）和大结晶处（ｂ）所得的ＭＡＬＤＩ质谱图Ｆｉｇ．２ＭＡＬＤＩｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｕｍｒｅｃｏｒｄｅｄｉｎａｒｅｇｉｏｎｗｈｅｒｅｃｒｙｓｔａｌｓａｒｅｖｅｒｙｆｉｎｅｌｙｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ（ａ）ａｎｄｒｅｃｏｒｄｅｄｏｎａｌａｒｇｅｃｒｙｓｔａｌ（ｂ）分析甘精胰岛素的质谱图观察到了相似的现象，结果示于图３。从图３可见，除了ｍ／ｚ４８０９．２０离子外，所有质谱峰与图２中结果相同。结果证实，含二硫键的蛋白质ＩＳＤ的发生依赖于其结晶状态，这与采用ＭＡＬＤＩＩＳＤ研究全甲基化糖的结果［２３］一致。在其报道中，因为糖对阳离子的亲和性较高，所以碎裂可以由样品点无定形区域的高浓度钠所避免。另一方面，由于基质晶体处没有钠离子，糖苷键被质子化而断裂。这种机理不能解释当前的实验现象，因为多肽是被质子化的，对于此现象的合理解释是：结晶越小，样品吸收的激光强度越小，ＭＡＬＤＩ过程越温和；反之，结晶越大，样品吸收的激光强度越大，ＭＡＬＤＩ过程越剧烈［２４］。注：左图为以ＦＡ为基质的经胰蛋白酶酶解后甘精胰岛素的位点照片；※号标记为通过对称和非对称断裂二硫键而产生的碎片离子图３均匀结晶位置（ａ）和大结晶处（ｂ）所得到的ＭＡＬＤＩ质谱图Ｆｉｇ．３ＭＡＬＤＩｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｕｍｒｅｃｏｒｄｅｄｉｎａｒｅｇｉｏｎｗｈｅｒｅｃｒｙｓｔａｌｓａｒｅｖｅｒｙｆｉｎｅｌｙｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ（ａ）ａｎｄｒｅｃｏｒｄｅｄｏｎａｌａｒｇｅｃｒｙｓｔａｌ（ｂ）为更

【参考文献】：
期刊论文
[1]HPLC MALDI-TOF质谱法检测IFN-α2b二硫键结构[J]. 张平.  海峡药学. 2016(05)
[2]基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱鉴定鲨鱼硒结合蛋白[J]. 王勇,李水明,何曼文.  质谱学报. 2013(05)



本文编号：3329653