氨基己酸为配基的新型弱阳离子交换/疏水双功能色谱固定相对蛋白质的分离纯化

发布时间：2021-09-19 05:37

　　以硅胶为基质、氨基己酸为配基制备了一种新型弱阳离子交换/疏水（WCX/HIC）双功能混合模式色谱固定相。该固定相配基具有一定的疏水性且含有羧基,在高盐浓度下表现为HIC的性质,可作为HIC固定相使用;在低盐浓度条件下表现为离子交换的性质,可作为WCX固定相使用。分别考察了该介质在WCX和HIC两种模式下对标准蛋白质的分离性能,并与商品柱进行比较。结果表明,所合成的WCX/HIC双功能固定相在WCX和HIC两种模式下对蛋白质均有较高的分离度和选择性,且分离能力与商品柱相当,两种模式下标准蛋白质的质量和活性回收率均大于93%,表明该柱具有"一柱二用"的功能,适于生物大分子的分离纯化。基于此双功能色谱柱构建的在线单柱二维液相色谱（2DLC-1C）可在60 min内实现8种蛋白质的快速分离。在70 min内完成了对蛋清中溶菌酶的二维纯化,纯度可达到98.3%。该技术中一根色谱柱可当作两根色谱柱使用,对蛋白质组学研究和重组蛋白药物的生产具有重要的应用价值。 

【文章来源】：色谱. 2016,34(12)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 实验部分
    1.1 仪器与试剂
    1.2 实验部分
        1.2.1 固定相的制备
        1.2.2 色谱条件
        1.2.3 溶菌酶的活性测定方法
        1.2.4 蛋白质含量的测定
        1.2.5 蛋白质回收率的测定
        1.2.6 静态吸附量的测定
2 结果与讨论
    2.1 氨基己酸为配基的WCX/HIC双功能固定相对蛋白质的分离
    2.2 质量回收率、活性回收率和静态吸附量
    2.3 在线单柱二维液相色谱对蛋白质的分离
    2.4 在线单柱二维液相色谱对蛋清中溶菌酶的纯化
3 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]基于超高效液相色谱-高分辨质谱联用技术的桑黄干预后大鼠尿液代谢组学分析[J]. 董宇,俞忠明,李洪玉,赵丽沙,寿旦.  色谱. 2016(08)
[2]在线单柱二维液相色谱法对蛋清中三种活性蛋白的快速分离纯化[J]. 王建山,夏红军,万广平,刘家玮,金丽花,白泉.  化学学报. 2016(03)
[3]采用高效液相色谱-质谱考察家福捕鸟蛛粗毒中多肽和蛋白质的多样性[J]. 胡朝暾,肖震,周熙,陈佳,陈波,刘中华.  色谱. 2015(06)
[4]在线二维液相色谱法同时测定婴幼儿和成人配方营养品中的维生素A、D3和E[J]. 张艳海,其布勒哈斯,金燕,王佳,马文丽.  色谱. 2015(03)
[5]基于大体积循环进样的低丰度蛋白质富集[J]. 张权青,张磊,高小迪,张维冰,张庆合.  色谱. 2014(11)
[6]用于人血浆中蛋白质分离的在线阵列式二维常规柱液相色谱系统的建立[J]. 黄志,洪广峰,高明霞,张祥民.  色谱. 2014(04)
[7]在线单柱二维液相色谱法快速纯化牛胰腺中细胞色素C[J]. 杨晓明,余炜,耿信笃.  中国科学:化学. 2013(05)
[8]弱阳离子交换色谱中疏水作用对蛋白保留的影响[J]. 孙萱,杨云,耿信笃.  分析科学学报. 2010(01)



本文编号：3401124