以RAD51为靶标的BRCA1片段肽的设计合成及其相互作用研究
发布时间：2023-05-05 23:14
乳腺癌是众多威胁女性健康的恶性肿瘤之一。随着人类对乳腺癌深入研究发现携带有抑癌基因BRCA1突变的患者比常人更易患病。BRCA1蛋白可维持基因组稳定性,其突变会影响RAD51蛋白的修复功能,使肿瘤细胞产生耐药性。为了改善RAD51蛋白的修复功能,我们对BRCA1蛋白进行突变,研究突变肽与RAD51的相互作用。选择BRCA1蛋白中的保守片段BRCA1846-871作为研究的多肽,以RAD51蛋白中的关键肽段为受体,通过计算机辅助设计并筛选出与RAD51蛋白相互作用较强的BRCA1846-871单突变肽6条和五突变肽9条。采用固相合成法将目标多肽合成并利用反相高效液相色谱技术对这些多肽分离纯化得到纯度大于93%的目标产物。使用电喷雾电离质谱技术对这些多肽进行表征。通过圆二色光谱法和荧光光谱法研究BRCA1846-871及其突变肽与RAD51关键肽段的相互作用。圆二色谱图显示,任意一条BRCA1片段配体均使RAD51关键肽段的二级结构发生了变化。单突变肽中,F、G、E和N使RAD51181-200受体的二...
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言
1.1 多肽的研究现状
1.1.1 多肽的概念及来源
1.1.2 多肽的结构特点及性质
1.1.3 多肽的功能及应用
1.2 RAD51和BRCA1
1.2.1 乳腺癌
1.2.2 BRCA1的结构与功能
1.2.3 RAD51的结构和功能
1.3 计算机辅助活性多肽的设计
1.4 多肽的化学合成
1.4.1 固相有机合成法
1.4.2 多肽分段合成法
1.5 多肽的纯化及表征
1.5.1 反相高效液相色谱
1.5.2 凝胶过滤色谱法
1.5.3 离子交换色谱法
1.5.4 多维高效液相色谱
1.5.5 多肽的表征
1.6 多肽BRCA1和RAD51 相互作用的研究方法
1.6.1 圆二色光谱法
1.6.2 荧光光谱法
1.7 论文的研究目的和内容
1.7.1 研究目的
1.7.2 研究内容
第二章 BRCA1846-871、BRCA1846-871突变肽的设计、合成及靶肽RAD关键肽段的合成与表征
2.1 目标多肽的设计及其理化性质
2.1.1 目标多肽的设计
2.1.2 目标多肽理化性质
2.2 目标多肽的固相合成与表征
2.2.1 实验仪器
2.2.2 实验试剂
2.2.3 溶液的配制
2.2.4 多肽合成步骤
2.2.4.1 树脂的溶胀
2.2.4.2 脱除Fmoc氨基保护基团
2.2.4.3 氨基酸的活化、偶联及封端
2.2.4.4 切割树脂并离心粗品
2.2.4.5 分离纯化粗品
2.2.5 多肽的质谱表征
2.3 结果与讨论
2.3.1 设计结果与理化性质分析
2.3.2 目标多肽的RP-HPLC分析及质谱表征结果
2.4 本章小结
第三章 BRCA1846-871及BRCA1846-871突变肽与RAD51 关键肽段的相互作用研究
3.1 实验部分
3.1.1 实验仪器与药品
3.1.2 溶液的配制
3.1.3 圆二色光谱法研究配体多肽与受体多肽间相互作用
3.1.4 荧光光谱法研究配体多肽与受体多肽间相互作用
3.2 结果与讨论
3.2.1 圆二色光谱分析
3.2.1.1 BRCA1846-871 K862 单突变配体与RAD51181-200 受体间相互作用
3.2.1.2 BRCA1846-871 五突变配体与RAD51158-180 受体间相互作用
3.2.1.3 BRCA1846-871 五突变配体与RAD51181-200 受体间相互作用
3.2.2 荧光光谱分析
3.2.2.1 BRCA1846-871及BRCA1846-871K862 单突变肽与RAD51181-200 相互作用的荧光光谱分析
3.2.2.2 BRCA1846-871及BRCA1846-871 五突变肽与RAD51158-180 相互作用的荧光光谱分析
3.2.2.3 BRCA1846-871及BRCA1846-871 五突变肽与RAD51181-200 相互作用的荧光光谱分析
3.3 本章小结
结论
参考文献
附录
个人简历
致谢
本文编号：3808551
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言
1.1 多肽的研究现状
1.1.1 多肽的概念及来源
1.1.2 多肽的结构特点及性质
1.1.3 多肽的功能及应用
1.2 RAD51和BRCA1
1.2.1 乳腺癌
1.2.2 BRCA1的结构与功能
1.2.3 RAD51的结构和功能
1.3 计算机辅助活性多肽的设计
1.4 多肽的化学合成
1.4.1 固相有机合成法
1.4.2 多肽分段合成法
1.5 多肽的纯化及表征
1.5.1 反相高效液相色谱
1.5.2 凝胶过滤色谱法
1.5.3 离子交换色谱法
1.5.4 多维高效液相色谱
1.5.5 多肽的表征
1.6 多肽BRCA1和RAD51 相互作用的研究方法
1.6.1 圆二色光谱法
1.6.2 荧光光谱法
1.7 论文的研究目的和内容
1.7.1 研究目的
1.7.2 研究内容
第二章 BRCA1846-871、BRCA1846-871突变肽的设计、合成及靶肽RAD关键肽段的合成与表征
2.1 目标多肽的设计及其理化性质
2.1.1 目标多肽的设计
2.1.2 目标多肽理化性质
2.2 目标多肽的固相合成与表征
2.2.1 实验仪器
2.2.2 实验试剂
2.2.3 溶液的配制
2.2.4 多肽合成步骤
2.2.4.1 树脂的溶胀
2.2.4.2 脱除Fmoc氨基保护基团
2.2.4.3 氨基酸的活化、偶联及封端
2.2.4.4 切割树脂并离心粗品
2.2.4.5 分离纯化粗品
2.2.5 多肽的质谱表征
2.3 结果与讨论
2.3.1 设计结果与理化性质分析
2.3.2 目标多肽的RP-HPLC分析及质谱表征结果
2.4 本章小结
第三章 BRCA1846-871及BRCA1846-871突变肽与RAD51 关键肽段的相互作用研究
3.1 实验部分
3.1.1 实验仪器与药品
3.1.2 溶液的配制
3.1.3 圆二色光谱法研究配体多肽与受体多肽间相互作用
3.1.4 荧光光谱法研究配体多肽与受体多肽间相互作用
3.2 结果与讨论
3.2.1 圆二色光谱分析
3.2.1.1 BRCA1846-871 K862 单突变配体与RAD51181-200 受体间相互作用
3.2.1.2 BRCA1846-871 五突变配体与RAD51158-180 受体间相互作用
3.2.1.3 BRCA1846-871 五突变配体与RAD51181-200 受体间相互作用
3.2.2 荧光光谱分析
3.2.2.1 BRCA1846-871及BRCA1846-871K862 单突变肽与RAD51181-200 相互作用的荧光光谱分析
3.2.2.2 BRCA1846-871及BRCA1846-871 五突变肽与RAD51158-180 相互作用的荧光光谱分析
3.2.2.3 BRCA1846-871及BRCA1846-871 五突变肽与RAD51181-200 相互作用的荧光光谱分析
3.3 本章小结
结论
参考文献
附录
个人简历
致谢
本文编号：3808551
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教材专著
