基于羧基功能化碳球的溶菌酶固定化和表面印迹研究

发布时间：2024-03-22 21:24

　　随着医疗诊断、生物化学和蛋白质组学等领域的快速发展,对特定蛋白质的识别与检测成为研究热点.目前,在复杂样品中分离蛋白的主要原理是基于抗原和抗体之间的特定识别作用.然而由于生物抗体的高成本、低稳定性等缺点,限制了它的进一步应用和发展.以高分子聚合物与模板分子通过共价键或非共价键作用制备的分子印迹聚合物材料(Molecularly Imprinted Polymers,MIPs)的出现,使得这一目标的实现成为可能.因此,结合模板固定化策略和表面印迹技术,制备了溶菌酶印迹核-壳碳微纳米微球,并考察了蛋白质初始浓度、蛋白质溶液与印迹材料接触时间对吸附量的影响,并完成了吸附过程的动力学及等温吸附研究.实验结果表明,该印迹纳米材料对目标蛋白的吸附量为71 mg/g,吸附平衡时间为100 min,对目标蛋白有较好的选择性,印迹因子可达3.3.

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【部分图文】：

图1丙烯酸添加量对碳球表面

对于羧基功能化碳微球基质,丙烯酸用量是控制其表面电荷、形貌和蛋白固定化能力的重要参数.如图1所示,随着丙烯酸用量从0～2wt%的增加,CFCs的负表面电荷显著增加.但碳球上溶菌酶的固定化量呈现先增加后减少的趋势,在2wt%的丙烯酸用量下,最大固定化量约为59mg/g.这可能....

图4溶菌酶浓度-吸光度(Abs)标准曲线

通过紫外分光光度法测得温度为25℃,pH值为7时,不同浓度下溶菌酶水溶液的吸光度,从而制得溶菌酶溶液-吸光度(Abs)标准曲线,对曲线进行线性拟合,如图4所示,标准曲线拟合后方程表示为y=2.2936x+0.0732,R2=0.9984.2.2.2多巴胺聚合时间对印迹效....

图5多巴胺聚合时间对印迹效果的影响

在表面印迹技术中,印迹层的厚度是影响MIPs识别能力的重要因素,因此本文研究了多巴胺聚合时间对CFC@MIPs识别的影响[16-18].如图5所示,聚合时间不到40min的时候,识别能力CFC@MIPs随着反应时间的增加而显著增加,表明聚多巴胺层的增厚的初始阶段聚合有利于建设更....

图6不同接触时间内CFC@MIPs和

式(2)、(3)中:Qe(mg/g)和Qt(mg/g)分别为平衡时刻和不同时刻对应的吸附容量.k1(min-1)和k2(mg·g-1min-1)分别是准一级和准二级吸附速率常数.准一阶模型描述了吸附位点的占用率与未占据位点的数量成正比,而准二阶模型则是吸附质与吸附质的化学吸附量的....

本文编号：3934972