Thermotoga neapolitana来源的丙酮酸铁氧化还原蛋白酶基因的克隆表达及酶学性质分析

发布时间：2024-06-07 05:58

　　新阿波罗栖热袍菌(Thermotoga neapolitana)是一种超嗜热菌,属于革兰氏阴性菌,其最适生长温度高达80℃,T.neapolitana利用广泛的底物发酵产氢和微量乙醇,其代谢途径中的一个关键酶是丙酮酸铁氧化还原蛋白酶(PFOR)。PFOR全酶是由α,β,γ,δ四个亚基组成,PFOR酶催化丙酮酸和辅酶A转化成乙酰辅酶A。它使用焦磷酸硫胺素(TPP)作为辅酶。新阿波罗栖热袍菌(T.neapolitana)来源的丙酮酸铁氧化还原蛋白酶的酶学特性还未阐明,本研究从新阿波罗栖热袍菌(T.neapolitana)中克隆丙酮酸铁氧化还原蛋白酶基因,在大肠杆菌中进行重组表达,对重组表达的PFOR酶进行纯化,和酶学性质分析,以及对PFOR酶酶法合成乙酰辅酶A进行了探索。主要研究内容与研究结果如下:(1)构建丙酮酸铁氧化还原蛋白酶重组表达质粒pET-PFOR:采用PCR方法从新阿波罗栖热袍菌全基因组中扩增出目标基因片段,并以pET表达载体为基础,构建出含丙酮酸铁氧化还原蛋白酶基因的重组表达质粒。(2)重组丙酮酸铁氧化还原蛋白酶的表达和纯化。将重组表达质粒转入到大肠杆菌E.coli BL21...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

产量是酿酒酵母的2.5倍，也是公认的安全菌株，但是它只能利用如葡萄糖、果糖、蔗糖等，不能代谢戊糖，而且还会代谢一些副产物[运动发酵单胞菌在工业应用上有了较大的局限性。利用大肠杆菌产有较其它常温菌的优势，它有完整的五碳糖和六碳糖的代谢途径，,底物范围广等优点，但同时存在与运动....

乙酸和乙醇。嗜热厌丙酮酸代谢（通常在嗜热厌氧杆菌和嗜热厌氧杆菌中）由PFOR催化，酸转化为乙酰辅酶A和CO2。这些氧化还原酶的活性取决于细菌种类长条件[59]。已有报道显示在解糖热厌氧杆菌中大部分电子以NAD（P）失而不是产生氢。在热纤梭菌中，通过PFL酶形成甲酸....

并在丙酮酸异化中起关键作用[64]。丙酮酸铁氧化还原蛋白酶（PFOR）基因在古细菌和真核生物中存在（如图1.3）。古细菌中似乎都含有PFOR基因；它广泛分布于细菌中，厌氧原生动物也存在PFOR基因[65]。图1.3丙酮酸铁氧化还原蛋白酶[64]Fig1.3Pyru....

图1.3丙酮酸铁氧化还原蛋白酶[64]Fig1.3PyruvateFerredoxinOxidoreductase[64]酮酸铁氧化还原酶的结构eapolitanaPFOR与非洲脱硫弧菌PFOR一样，含有3个[4Fe-4列分析证实存在两种典型的高度保守的富....

本文编号：3990887