基于环氧开环反应的核酸适配体键合整体柱的制备及性能研究

发布时间：2024-07-10 20:29

　　核酸适配体稳定性好、易修饰、可重复利用、具有高亲和力和高特异性,可与特定目标物结合,受到科学工作者越来越多的关注。本文通过环氧开环反应,将末端修饰有氨基的核酸适配体固载至表面带有环氧基团的整体柱上,制备了三种核酸适配体键合整体柱,以赭曲霉毒素A(OTA)为研究对象,开展了核酸适配体键合整体柱制备技术及性能研究。主要研究具体如下:第一章,文献综述。概述了亲和色谱、整体柱的制备及分类和核酸适配体的特点、固载方式。以赭曲霉毒素A为应用对象,提出了论文选题依据和研究方案。第二章,Aptamer@poly(GMA-co-POSS-MA)亲和整体柱的制备及性能研究。以甲基丙烯酸酯缩水甘油酯(GMA)为功能单体,多面体低聚倍半硅氧烷(POSS-MA)为交联剂,制备了表面带有环氧基团的固定相;通过环氧与氨基开环反应,制备了5’-氨基核酸适配体键合的整体柱。考察了聚合整体柱的形貌结构、配方组成、机械稳定性、重现性等,测定核酸适配体修饰前后整体柱电渗流和红外光谱;考察了核酸适配体柱对OTA单样及含有赭曲霉毒素B和黄曲霉毒素B1的混合样进行选择性富集分离,所制备的核酸适配体亲和柱疏水性强,对OTA具有特异性...

【文章页数】：92 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
主要缩略词表
第一章 绪论
    1.1 概述
    1.2 整体柱制备及分类
        1.2.1 有机聚合整体柱
            1.2.1.1 聚苯乙烯类整体柱
            1.2.1.2 聚甲基丙烯酸酯类整体柱
            1.2.1.3 聚丙烯酰胺类整体柱
        1.2.2 无机硅胶整体柱
        1.2.3 有机-无机杂化整体柱
    1.3 核酸适体亲和整体柱
        1.3.1 亲和色谱
        1.3.2 核酸适配体
        1.3.3 核酸适体亲和整体柱制备
            1.3.3.1 非共价键固定法
            1.3.3.2 共价键固定法
    1.4 论文的选题依据及研究内容
第二章 Aptamer@poly(GMA-co-POSS-MA)亲和整体柱的制备及性能表征
    2.1 引言
    2.2 实验部分
        2.2.1 材料与试剂
            2.2.1.1 试剂
            2.2.1.2 材料
            2.2.1.3 溶液的配制
        2.2.2 仪器与设备
        2.2.3 整体柱制备
            2.2.3.1 石英毛细管预处理
            2.2.3.2 毛细管内壁烯基化
            2.2.3.3 poly(GMA-co-POSS-MA)有机-硅胶杂化整体柱的制备
            2.2.3.4 赖氨酸修饰poly(GMA-co-POSS-MA)整体柱的制备
            2.2.3.5 Aptamer@poly(GMA-co-POSS-MA)亲和整体柱的制备
        2.2.4 实验方法
            2.2.4.1 OTA富集洗脱检测步骤
            2.2.4.2 电渗流的计算方法
            2.2.4.3 核酸适配体覆盖密度的计算
            2.2.4.4 亲和整体柱OTA负载量测定
            2.2.4.5 OTA标准工作曲线的构建
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 poly(GMA-co-POSS-MA)柱性能表征
            2.3.1.1 poly(GMA-co-POSS-MA)杂化整体柱的组成优化
            2.3.1.2 机械稳定性
            2.3.1.3 重现性
            2.3.1.4 保留作用机制
        2.3.2 Aptamer@poly(GMA-co-POSS-MA)亲和整体柱性能分析
            2.3.2.1 SEM形貌分析
            2.3.2.2 电渗流分析
            2.3.2.3 红外光谱(IR)分析
            2.3.2.4 OTA特异性识别分析
            2.3.2.5 混合样品中OTA选择性分析
        2.3.3 核酸适配体亲和整体柱适配体覆盖密度
        2.3.4 核酸适配体亲和整体柱的最大负载量
        2.3.5 核酸适配体亲和整体柱检测限
    2.4 小结
第三章 Aptamer@poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)亲和整体柱的制备及性能表征
    3.1 引言
    3.2 实验部分
        3.2.1 材料与试剂
            3.2.1.1 试剂
        3.2.2 整体柱制备
            3.2.2.1 poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)有机-硅胶杂化整体柱的制备
            3.2.2.2 赖氨酸修饰poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)整体柱的制备
            3.2.2.3 Aptamer@poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)亲和整体柱的制备
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)柱性能表征
            3.3.1.1 poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)杂化整体柱组成优化
            3.3.1.2 机械稳定性
            3.3.1.3 重现性
        3.3.2 核酸适配体的衍生
        3.3.3 Aptamer@poly(epoxy-MA-co-POSS-MA)亲和整体柱性能分析
            3.3.3.1 形貌分析
            3.3.3.2 电渗流分析
            3.3.3.3 红外光谱(IR)分析
            3.3.3.4 保留作用机制
            3.3.3.5 OTA特异性识别分析
            3.3.3.6 混合样品中OTA选择性分析
        3.3.4 不同洗脱试剂的影响
        3.3.5 核酸适配体亲和整体柱适配体覆盖密度
        3.3.6 核酸适配体亲和整体柱的最大负载量
        3.3.7 核酸适配体亲和整体柱检测限
    3.4 小结
第四章 Aptamer@poly(epoxy-MA-co-PETA)亲和整体柱的制备及性能表征
    4.1 引言
    4.2 实验部分
        4.2.1 材料与试剂
        4.2.2 整体柱制备
            4.2.2.1 poly(epoxy-MA-co-PETA)有机-硅胶杂化整体柱的制备
            4.2.2.2 赖氨酸修饰poly(epoxy-MA-co-PETA)整体柱的制备
            4.2.2.3 Aptamer@poly(epoxy-MA-co-PETA)亲和整体柱的制备
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 poly(epoxy-MA-co-PETA)柱性能表征
            4.3.1.1 poly(epoxy-MA-co-PETA)杂化整体柱组成优化
            4.3.1.2 机械稳定性
            4.3.1.3 重现性
        4.3.2 核酸适配体的衍生
        4.3.3 Aptamer@poly(epoxy-MA-co-PETA)亲和整体柱性能分析
            4.3.3.1 形貌分析
            4.3.3.2 电渗流分析
            4.3.3.3 红外光谱(IR)分析
            4.3.3.4 保留机制的探索
            4.3.3.5 核酸适配体亲和整体柱色谱性能对比分析
            4.3.3.6 OTA特异性识别分析
            4.3.3.7 混合样中OTA选择性分析
        4.3.4 不同核酸适配体亲和整体柱对OTA特异性识别作用
        4.3.5 不同核酸适配体亲和整体柱适配体覆盖密度
        4.3.6 核酸适配体亲和整体柱的最大负载量
        4.3.7 核酸适配体亲和整体柱检测限
    4.4 小结
结论
参考文献
致谢
个人简历
在学期间已发表和录用的论文及专利
参与的科研项目



本文编号：4004688