磷脂类药品与辅料中磷脂组分的分离测定研究

发布时间：2017-09-08 01:45

  本文关键词：磷脂类药品与辅料中磷脂组分的分离测定研究

  更多相关文章： 猪肺磷脂 蛋黄卵磷脂 大豆磷脂 高效液相色谱法 超临界流体色谱 蒸发光散射检测器 二氧化碳

【摘要】：磷脂是一种天然的生物表面活性剂,广泛分布于动植物界。磷脂中主要含有磷脂酰胆碱(PC)以及少量的磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、鞘磷脂(SM)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)、棕榈酸甘油酯(TG)、胆固醇(CH)等组分。它们是动植物中细胞膜、核膜、质体膜的基本成分,也是生命的基础物质之一,具有重要的营养和医用价值,广泛应用于医药、食品、化工等领域。由于组分复杂与缺少紫外吸收,磷脂类药品与辅料的质量控制一直以来是药物分析的研究热点与难点。本论文分别采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法和超临界流体色谱法分离并定量测定了以猪肺磷脂注射液(商品名：固尔苏)为代表的磷脂类药品和以蛋黄卵磷脂、大豆磷脂为代表的磷脂类辅料中各磷脂组分,为其质量控制提供技术手段和参考依据,论文内容主要包括以下两个部分：(1)首次建立了高效液相色谱-蒸发光散射检测法分离并测定固尔苏中9种磷脂组分。与固尔苏现行进口药品注册标准中采用双向薄层色谱法分离后仅测定PC含量的方法相比,该方法操作简便、稳定、重现性好,能够提供多种磷脂的检验数据,更适用于控制企业批间产品的一致性。在色谱条件优化过程中,考察了二醇柱、氨基柱以及不同产家硅胶柱对固尔苏中各磷脂的分离影响；并以氯仿-甲醇-水-氨水为洗脱系统,考察了流动相各组分比例改变、流速、柱温对固尔苏中各磷脂组分的分离影响。最终选择Kromasil硅胶柱(4.6mm×250mm,5 μm)为固定相,以氯仿：甲醇：水：氨水(78：21：0.2：0.4)为流动相A,氯仿：甲醇：水：氨水(59：35：5：0.4)为流动相B,梯度洗脱,柱温25℃,流速1.0ml/min,蒸发光检测器检测。使用该方法对同一厂家中2种不同规格的共5个不同批号的样品进行分析,5批固尔苏样品中均分离出9种已知磷脂和一种未知组分,对已知磷脂进行定量分析,以SM为对照计算未知组分的相对含量,并对该方法进行了重现性、线性、检测限以及回收率等方法学验证。结果表明,各磷脂组分分离完全,以对照品溶液浓度的对数值(lgc)对相应峰面积的对数值(lgA)做线性回归,9种磷脂的线性关系均良好,线性相关系数为0.9984～0.9995,日内精密度为0.81%～1.83%,日间精密度为0.74%～2.15%,检测限为4.1～106.5 ng,定量限为5.5～221.3 ng,回收率为98.5%～101.3%,5批固尔苏中各磷脂测定结果为：CH 0.10～0.13mg/ml,PE 2.62～2.93mg/ml, PI 3.51～3.62 mg/ml,PS 0.50～0.56 mg/ml,LPE 0.05～0.07 mg/ml,PC 68.51～72.42 mg/ml, SM 1.10～1.15 mg/ml,LPC 0.1～0.34 mg/ml,未知组分1.07～1.26 mg/ml。(2)首次建立了超临界流体色谱法分离并测定蛋黄卵磷脂和大豆磷脂中8种磷脂组分。该方法简便快速、专属性高,结果准确可靠,方法重复性好,使用的有机溶剂较少,减少了对人体的伤害,为磷脂的定量分析提供了新的检测技术和思路。实验中采用超临界流体色谱仪与蒸发光散射检测器联用,考察了硅胶柱(ZorbaxRx-SIL,3.0 mm×100mm,1.8μm)、硅胶柱(ZorbaxSilica,4.6mm×250mm,5μm)、氰基柱(Zorbax CN, 3.0 mm×100mm,1.8μm)、氨基柱(Zorbax NH2,4.6 mm×250mm,5μm)、苯基柱(Pursuit PFP,4.6 mm×150mm,5μm)和二醇柱(LiChrospher 100 Diol,4.0 mm×250mm,5um)对磷脂的分离影响,选择ZorbaxSilica柱(4.6mm×250mm,5μm)与LiChrospher 100 Diol柱(4mm×250mm,5μm)串联,同时考察了流动相中添加剂的种类以及组分比例、流速、柱温、蒸发光条件的改变对磷脂分离的影响。最终选择超临界流体二氧化碳(CO2)为流动相A,甲醇：氨水(100：0.5)为流动相B,进行梯度洗脱,柱温为30℃,流速为2.3 ml/min,蒸发光检测器检测。使用该方法对4家企业提供的共11批蛋黄卵磷脂和3家企业提供的共4批不同大豆磷脂进行分析,磷脂样品中分离出8种磷脂组分,对磷脂进行定量分析,并对该方法进行了重现性、线性、检测限以及回收率等方法学验证。结果表明,各磷脂组分色谱峰间的分离度为1.90-11.92,理论板数为3575-18786。以对照品溶液浓度的对数值(1gc)对相应峰面积的对数值(lgA)做线性回归,8种磷脂的线性关系均良好,线性相关系数为0.9967～0.9998,日内精密度为0.2%～2.0%,日间精密度为0.5%～2.0%,检测限为137～584 ng,定量限为273～1169 ng,回收率为97.1%～100.6%。11批蛋黄卵磷脂中各磷脂测得结果为：TG 0.2%～1.8%,CH 0.4%～2.0%,PE 7.8～15.0%,LPE 0.7%～1.0%, PI 0.7%～1.8%,PC 68.0%～89.4%, SM 1.0%～1.9%, LPC0.6%～1.7%,4批大豆磷脂中各磷脂测得结果为：TG 0.1%～0.8%, CH 0.2%～0.3%, PE 5.0%～17.8%,LPE0.0%, PI 0.9%～1.6%,PC 53.6%～72.4%,SM0.0%,LPC 1.0%～2.9%。
【关键词】：猪肺磷脂 蛋黄卵磷脂 大豆磷脂 高效液相色谱法 超临界流体色谱 蒸发光散射检测器 二氧化碳
【学位授予单位】：上海应用技术学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：TQ460.72;O657.7
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-13
• 英文缩写说明13-14
• 第1章 前言14-26
• 1.1 磷脂的简介14-17
• 1.1.1 磷脂的结构及组成14-16
• 1.1.2 磷脂的来源16
• 1.1.3 磷脂理化性质16-17
• 1.2 磷脂的功能及应用17-20
• 1.2.1 磷脂的功能17-18
• 1.2.2 磷脂的应用18-20
• 1.3 磷脂分析方法的综述20-24
• 1.3.1 薄层色谱法分析磷脂中各组分20-21
• 1.3.2 高效液相色谱法分析磷脂中各组分21-23
• 1.3.3 质谱法分析磷脂中各组分23-24
• 1.4 本课题的研究目的和意义24-26
• 第2章 猪肺磷脂注射液中9种磷脂组分的HPLC-ELSD法测定26-44
• 2.1 实验部分27-28
• 2.1.1 实验仪器与试药27
• 2.1.2 溶液的配制27
• 2.1.3 色谱条件27-28
• 2.1.4 定量方法28
• 2.2 实验结果28-35
• 2.2.1 系统适用性28-29
• 2.2.2 线性关系29-33
• 2.2.3 精密度试验33
• 2.2.4 检测限33
• 2.2.5 回收率试验33-34
• 2.2.6 样品含量试验34-35
• 2.3 讨论35-42
• 2.3.1 色谱系统的选择35-36
• 2.3.2 Plackett-Burman设计优化色谱条件36-38
• 2.3.3 流速的选择38
• 2.3.4 进样浓度的选择38-40
• 2.3.5 色谱柱的选择40-42
• 2.4 本章小结42-44
• 第3章 超临界流体色谱法测蛋黄和大豆磷脂中的8种磷脂组分44-64
• 3.1 实验部分46-48
• 3.1.1 仪器与试药46
• 3.1.2 溶液的配制46-47
• 3.1.3 色谱条件47-48
• 3.2 实验结果48-55
• 3.2.1 系统适用性48-49
• 3.2.2 线性关系49-52
• 3.2.3 精密度和重复性试验52-53
• 3.2.4 溶液稳定性试验53
• 3.2.5 检测限53
• 3.2.6 回收率试验53
• 3.2.7 样品含量测定53-55
• 3.3 讨论55-62
• 3.3.1 流动相中改性剂的选择55-56
• 3.3.2 色谱柱的选择56-61
• 3.3.3 色谱条件的选择61
• 3.3.4 检测器条件的选择61
• 3.3.5 供试品溶液浓度的选择61-62
• 3.4 本章小结62-64
• 全文总结64-67
• 参考文献67-75
• 致谢75-76
• 攻读学位期间所开展的科研项目和发表的学术论文76

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本文编号：811161