shRNA沉默TRAF6基因对急性肝损伤小鼠炎症反应的影响

发布时间：2017-10-10 07:43

  本文关键词：shRNA沉默TRAF6基因对急性肝损伤小鼠炎症反应的影响

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【摘要】：目的通过shRNA沉默肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumour necrosis factor receptor associated factor 6,TRAF6)基因表达,研究TRAF6沉默基因对内毒素/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)诱导的急性肝衰竭小鼠炎症反应的影响。方法通过体外实验筛选针对TRAF6基因的最有效小干扰RNA(siRNA)序列,采用流体力学注射法将pTRAF6-shRNA表达质粒转染BALB/c小鼠,24h后重复注射1次。第2次注射后24h,予LPS/D-GalN腹腔注射制备急性肝衰竭内毒素炎症模型。设正常对照组、模型对照组、空白质粒/LPS组及RNAi/LPS组。观察各组小鼠肝脏病理变化,Real-time PCR检测TRAF6、IL-6及COX-2mRNA的表达,ELISA检测血清TNF-α、IL-1β及TGF-β1水平变化,Western blot检测肝细胞TRAF6、NF-κB p65的表达。结果 Real-time PCR及Western blot检测显示,pTRAF6-shRNA1能有效沉默TRAF6mRNA及蛋白表达,其中TRAF6mRNA表达较正常小鼠下降约60.13%,TRAF6蛋白表达降低约52.08%,差异均有统计学意义(均P0.01)。ELISA检测显示各组小鼠TNF-α、IL-1β均于造模后8h达到峰值,TGF-β1于16h达到峰值;RNAi/LPS组小鼠血清TNF-α、IL-1β及TGF-β1水平明显低于同时间点模型对照组。Real-time PCR结果显示RNAi/LPS组小鼠IL-6、COX-2及TRAF6mRNA表达下降,与模型对照组比较差异均有统计学意义(均P0.01)。Western blot结果显示RNAi/LPS组小鼠肝组织总蛋白NF-κB p65表达水平显著高于正常对照组(P0.05),与模型对照组无差异,而胞核NF-κB p65明显低于模型对照组(P0.05)。结论 pTRAF6-shRNA可能通过下调NF-κB p65水平,抑制炎症相关细胞因子和炎性介质表达水平,从而减轻内毒素/半乳糖诱导的小鼠急性肝损伤。
【作者单位】： 武汉市妇女儿童医疗保健中心(武汉市儿童医院)重症医学科;华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科;华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科;华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室;
【关键词】： TRAF RNA干扰 TLR信号通路 NF-κB 急性肝衰竭
【分类号】：R575.3
【正文快照】： 急性肝功能衰竭(acute liver failure,ALF)是临床危重疾患之一,目前的内科综合治疗效果不理想,病死率高达80%。目前普遍认为,由内毒素(li-popolysaccharide,LPS)诱导的以肿瘤坏死因子(tumour necrosis factor,TNF)为核心的炎症反应在肝衰竭中扮演着重要的角色[1-2],上调这些细

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本文编号：1005190