1株产顺式-4-羟基-L-脯氨酸基因工程菌的构建及发酵初步优化

发布时间：2017-10-11 02:07

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【摘要】：顺式-4-羟基-L-脯氨酸是一种可用于合成多种药物和香料的手性结构物质。通过对L-脯氨酸顺式-4-羟化酶基因的优化设计,并引入色氨酸串联启动子,构建出1株能表达L-脯氨酸顺式-4-羟化酶的重组大肠杆菌JM109/p EHC4,从而可以将游离的L-脯氨酸转化为顺式-4-羟基-L-脯氨酸。对该菌株进行摇瓶发酵优化,得出优选培养基为(g/L):葡萄糖10,甘油10,蛋白胨10,NaCl 6,FeSO_4·7H_2O 0.278,L-抗坏血酸0.528,(NH_4)_2SO_45,K_2HPO41,MgSO_40.2,CaCl_20.015,L-脯氨酸4。在该条件下发酵12 h,顺式-4-羟基-L-脯氨酸的产量达到657.08mg/L,比优化前提高了3.76倍;在24 h时产量达到1 582.75 mg/L。研究结果为顺式-4-羟基-L-脯氨酸的微生物转化法生产提供了基础。
【作者单位】： 江南大学工业生物技术教育部重点实验室糖化学与生物技术教育部重点实验室;
【关键词】： L-脯氨酸顺式--羟化酶 密码子优化 重组大肠杆菌 微生物转化 发酵优化
【基金】：国家自然科学基金(30970058) 江苏省自然科学基金(BK2012554) 工业生物技术教育部重点实验室(江南大学)开放课题基金(KLIB-ZR200801)
【分类号】：TQ922
【正文快照】： L-羟脯氨酸(L-hydroxyproline,L-Hyp),是L-脯氨酸羟基化后的产物。根据其羟基化位置及空间结构的不同,可形成4种立体异构体:反式-4-羟基-L-脯氨酸(trans-4-Hyp)、顺式-4-羟基-L-脯氨酸(cis-4-Hyp)、反式-3-羟基-L-脯氨酸(trans-3-Hyp)和顺式-3-羟基-L-脯氨酸(cis-3-Hyp)。其中

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本文编号：1009863