‘小白杏’自交不亲和SFB基因RNAi表达载体的构建

发布时间：2017-10-12 03:26

  本文关键词：‘小白杏’自交不亲和SFB基因RNAi表达载体的构建

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【摘要】：【目的】应用RNA干扰(RNAi)技术在分子水平调控杏自交不亲和性状,为培育自交亲和杏品种奠定基础。【方法】基于南疆自交不亲和杏品种‘小白杏’(Prunus armeniaca‘Xiaobaixing’)花粉决定子SFB(S-haplotype-specific Fbox protein)基因3’端c DNA全长序列,选取SFB基因变异区上游距起始密码子61 bp处、大小为29 bp的片段作为干扰序列,棉花基因组DNA 242 bp的序列作为间隔片段,利用融合PCR(Fusion PCR)构建SFB基因发卡结构(intron-containing hairpin RNA,ihp RNA),再酶切连接到植物表达载体p CAMBIA-35S-MCS-NOS-NPTII上,构建SFB基因RNAi表达载体;用冻融转化法将重组质粒转化至农杆菌菌株(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404中。【结果】测序结果表明臂长29 bp、茎环242 bp的SFB基因ihp RNA结构融合成功,双酶切检验和PCR验证结果表明,该结构正确地插入p CAMBIA-35S-MCS-NOS-NPTII的启动子和终止子之间,说明SFB基因的RNAi表达载体p CAMBIA-RNAi-SFB构建成功;PCR验证和测序结果也表明重组质粒已经成功转入农杆菌LBA4404中。【结论】研究结果表明,应用融合PCR结合酶切连接的方法构建SFB基因的RNAi表达载体是可行的,为RNAi技术在果树自交不亲和性状改良上的应用创造了条件。
【作者单位】： 石河子大学农学院·特色果蔬栽培生理与种质资源利用兵团重点实验室;西南大学生物技术中心·农业部生物技术与作物品质改良重点开放实验室;
【关键词】： 杏 自交不亲和 SFB基因 RNAi表达载体
【基金】：国家自然基金面上项目(31272129)
【分类号】：S662.2
【正文快照】： 新疆是世界杏的起源中心之一,具有非常丰富的种质资源[1-3]。‘小白杏’(Prunus armeniaca‘Xiao-baixing’)属蔷薇科(Rosaeeae)李亚科(Prunoideae)杏属(Armeriaca)普通杏种(A.valgarislam)植物,是起源于新疆的著名杏品种之一,主要产于具有“中国白杏之乡”称号的库车县和轮台

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本文编号：1016386