党参CpUGPase基因的克

发布时间：2017-10-12 13:40

  本文关键词：党参CpUGPase基因的克隆、序列分析与原核表达

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【摘要】：目的为研究党参多糖代谢途径,从党参Codonopsis pilosula根中克隆多糖代谢关键酶尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶CpUGPase基因,并进行序列分析和原核表达。方法根据党参转录组中CpUGPase基因序列设计引物,通过RT-PCR扩增得CpUGPase开放阅读框(ORF)序列,并进行TA克隆、测序和序列分析;构建原核表达载体PET-28a-CpUGPase,转入大肠杆菌BL21(DE3)后,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下进行表达。结果 CpUGPase ORF序列全长1 413bp,编码470个氨基酸。序列分析表明,CpUGPase基因具有保守的UGPase_euk催化位点,属于A型糖基转移酶蛋白家族。构建PET-28a-CpUGPase重组质粒,获得稳定的原核表达体系。SDS-PAGE结果显示该蛋白的大小约54 900,与预测的蛋白相对分子质量一致。结论从党参根中克隆得到CpUGPase基因,并建立了稳定的原核表达体系,为进一步纯化CpUGPase蛋白,研究其结构和功能奠定了基础。
【作者单位】： 山西医科大学药学院;山西大学化学化工学院;
【关键词】： 党参 CpUGPase 基因克隆 序列分析 原核表达
【基金】：国家自然科学基金项目(81072987) 国家科技支撑计划项目(2011BAI07B07) 山西省高等学校中青年拔尖创新人才支持计划(晋教材[2012]146号)
【分类号】：S567.53
【正文快照】： 尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucosepyrophosphorylase,UGPase)在所有的真核生物碳水化合物代谢中起重要作用,主要催化反应Glc-1-P+UTP UDPG+PPi[1]。其产物UDPG(尿苷二磷酸葡萄糖)作为葡萄糖基供体主要参与蔗糖、纤维素、胼胝质、糖原等寡糖与多糖的合成,同时也是尿苷二

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本文编号：1019050