S100A10基因沉默对人软骨细胞内核转录因子NF-κB活性的影响

发布时间：2017-10-14 15:28

  本文关键词：S100A10基因沉默对人软骨细胞内核转录因子NF-κB活性的影响

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【摘要】：目的针对人S100A10基因设计siRNA序列并构建shRNA表达载体;重组载体转染人关节软骨(HCs)细胞,观察细胞内S100A10基因表达及其对细胞内核转录因子κB(NF-κB)活性的影响。方法登陆美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库,根据人钙结合蛋白A10(S100A10)基因信息,设计3条针对其编码区(CDS)区的小干扰RNA(siRNA)序列。根据设计的siRNA序列,设计两条互补的shRNA序列,构建shRNA重组表达载体;阳离子脂质体法转染shRNA重组表达载体到HCs细胞,转染后48 h,收集细胞,提取细胞总RNA及总蛋白,使用实时PCR(RT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)的方法检测转染后细胞中S100A10 mRNA及蛋白相对含量;Western blot检测细胞内NF-κB的P65及P50亚基磷酸化。数据统计使用单因素方差分析。结果成功设计siRNA序列并成功构建了shRNA表达载体;mRNA及蛋白含量检测结果显示,三条siRNA序列对目的基因均有沉默效果,其中1号siRNA序列最为-有效,其转染后48 h,细胞内mRNA及蛋白含量相比较未转染组细胞,分别下降了74.2%和76.4%,差异均有统计学意义(t=5.21,P0.01);HCs细胞内S100A10基因沉默,能够明显抑制核转录因子NF-κB活性,与对照组比较,P65及P50亚基磷酸化明显减弱(t=3.02,P0.01)。结论 S100A10基因沉默可以有效抑制HCs细胞内NF-κB活性。
【作者单位】： 江苏省盐城市第一人民医院骨科;
【关键词】： 钙结合蛋白A RNA干扰 NF-kappa B
【基金】：江苏省卫计委科研项目(H201256) 江苏省“333工程”科研基金资助项目(BAR2014143)
【分类号】：R684
【正文快照】： 作者单位:224006江苏省盐城市第一人民医院骨科Corresponding author:Xu Xiaozu,Email:scztougao@163.com钙结合蛋白A10(S100 calcium-binding proteinA10,S100A10),也称为P11或膜联蛋白Ⅱ轻链,是一个独特的S100蛋白家族成员,膜联蛋白(AnnexinⅡ)、磷脂酶A2(phospholipase A2,

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