花生过敏原蛋白Ara h 6基因克隆和原核表达

发布时间：2017-10-17 06:03

  本文关键词：花生过敏原蛋白Ara h 6基因克隆和原核表达

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【摘要】：本实验首先从花生中提取总RNA,利用反转录聚合酶链式反应技术克隆了花生过敏原蛋白Ara h 6全c DNA,并以此为模板扩增出Ara h 6目的基因。将目的基因与p MD19-T Simple质粒进行重组后转入BL21(DE3)宿主表达菌中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导产物表达,并利用镍离子亲和层析纯化表达产物。DNA测序结果显示Ara h 6基因片段全长为438 bp,编码145个氨基酸,与已知该蛋白DNA序列97%相同;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示表达产物分子质量为24 k D,与融合组氨酸标签的重组Ara h 6蛋白理论分子质量相符;质谱鉴定结果表明重组蛋白的一级结构与天然Ara h 6匹配度为100%;Western blotting结果显示融合蛋白能够为抗Ara h 6多克隆抗体所识别,具有免疫原性。
【作者单位】： 南昌大学食品科学与技术国家重点实验室中德联合研究院;浙江纺织服装职业技术学院;广东省疾病预防控制中心;
【关键词】： 花生 过敏原 Ara h 基因克隆表达 质谱鉴定
【基金】：“十二五”国家科技支撑计划项目(2011BAK10B03) 国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2013AA102205) 江西省科技支撑计划项目(20133BBF60004)
【分类号】：S565.2;TS201.21
【正文快照】： 食物过敏是人体对某些食物产生的变态反应,可导致多种临床病症,严重的会引起过敏性休克甚至死亡等[1-2]。据相关的流行病学研究表明,食物过敏影响约5%儿童及3%~4%成年人的健康,且呈增长趋势[3]。90%食物过敏反应是由花生、鱼、贝类、奶、蛋、大豆、坚果和小麦等八类高致敏性食

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本文编号：1047173