基因敲除质粒载体的构建及其在幽门螺杆菌基因敲除中的应用
本文关键词：基因敲除质粒载体的构建及其在幽门螺杆菌基因敲除中的应用
【摘要】：目的构建用于幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)同源重组双交换基因敲除的质粒载体,实现Hp内基因的快速敲除。方法以质粒pLYL03为骨架,重新排列质粒上的基因元件以减少冗余序列,用卡那霉素抗性基因(aphA)替换原质粒上的红霉素抗性基因作为抗性筛选标记,在抗性筛选标记两端构建多克隆位点用于同源重组同源臂的插入,由此构建用于Hp同源重组双交换基因敲除的质粒载体pSJHK。以质粒pSJHK为载体构建hp0169基因的同源重组双交换敲除质粒pSJHK-0169,通过电击转化方法将敲除质粒pSJHK-0169转入Hp中,用卡那霉素筛选转化子。结果以质粒pLYL03为基础构建用于Hp同源重组双交换基因敲除的质粒载体pSJHK,大小4 371bp。以基因hp0169作为目标基因构建同源重组双交换敲除质粒pSJHK-0169,经电击转化Hp中,获得卡那霉素抗性阳性转化子,测序确证基因敲除成功。结论构建的基因敲除质粒载体pSJHK实现了对Hp中目标基因的敲除,为Hp新基因功能研究和致病因子的发掘提供了有效的基因操作工具。
【作者单位】： 滨州医学院病原生物学教研室;
【关键词】： 幽门螺杆菌 基因敲除 质粒 同源重组
【基金】：国家自然科学基金青年基金项目(No.81471561,81501718) 山东省自然科学基金培养基金项目(No.ZR2015PC021,ZR2014CP020) 滨州医学院科技计划项目(No.BY2014KJ01);滨州医学院校级科研启动基金项目(No.BY2014KYQD10,BY2014KYQD11)
【分类号】：R378
【正文快照】： ***幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一种特异性寄生于人胃黏膜的革兰阴性微需氧菌。研究表明,Hp感染是慢性胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡等胃肠道疾病发生的重要病因,并与胃癌、胃粘膜相关淋巴样组织(MALT)淋巴瘤的发生密切相关[1-3]。1994年,世界卫生组织国际癌症研究机
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘德培，，方福德，梁植权;基因敲除[J];生理科学进展;1995年01期
2 贺松;张德纯;;基因敲除方法及其应用[J];中国微生态学杂志;2009年02期
3 黄P ;胡芳;曾祥云;;基因敲除模型技术及其在眼科研究中的应用现状[J];眼科新进展;2011年03期
4 叶真龙;王艳;金华君;刘韬;钱其军;;延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因敲除大鼠胚胎干细胞株的建立[J];中国组织工程研究;2013年01期
5 方福德;中国医学科学院实验动物研究所基因敲除中心成立并开始工作[J];中国医学科学院学报;2001年03期
6 王景;穆媛媛;黎庶;陈志瑾;熊坤;丛延广;;革兰阴性菌基因敲除载体的构建及其应用[J];第三军医大学学报;2009年23期
7 潘晓华;王宇罡;张戈;刘钟;曾万程;陈嘉凯;戴勇;秦岭;;ERβ基因敲除小鼠的繁殖、鉴定及检测[J];南方医科大学学报;2010年01期
8 郭敏利;朴永哲;王世全;黄玮;周华成;杨洪泽;唐丽娜;;丙酸杆菌基因敲除体系的构建及其应用[J];中国微生态学杂志;2013年07期
9 雷立芳;李大力;周军媚;叶湘漓;;BAI1基因敲除打靶载体的快速构建[J];生命科学研究;2012年02期
10 顾星星;陶慧;;Jagged1基因敲除小鼠血管内皮发育异常[J];交通医学;2006年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 贺松;张德纯;;基因敲除方法及其应用[A];重庆市预防医学会2009年论文集[C];2009年
2 王景;穆媛媛;黎庶;陈志瑾;熊坤;丛延广;;革兰阴性菌基因敲除载体的构建及其应用[A];重庆微生物学会第九届会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2009年
3 孟凡伟;;利用基因敲除研究小鼠Dapper2基因的功能[A];中国遗传学会模式生物与人类健康研讨会会议论文集[C];2010年
4 黄黎珍;顾为望;;利用体细胞核移植技术生产基因敲除猪的研究[A];第九届中国实验动物科学年会（2010新疆）论文集[C];2010年
5 隋聪;熊承良;沈士亮;;敲除Attractin或Mahoganoid基因对雄性小鼠生殖内分泌激素的影响[A];湘鄂赣首届性与生殖健康学术研讨会论文汇编[C];2007年
6 师福山;赵德明;;朊蛋白受体基因敲除的打靶载体构建[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(上册)[C];2010年
7 李志杰;丁壮;;基因敲除及其在动物疾病上的研究应用[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集（上）[C];2005年
8 周晴晴;闫红霞;金戈;康巧珍;;蛋白4.1R基因敲除对小鼠T细胞的影响[A];第九届中国实验动物科学年会（2010新疆）论文集[C];2010年
9 林蜜蜜;尹芙蓉;金畅;瞿佳;;LGR4基因敲除成年鼠眼表型研究[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年
10 路福平;田琳;;分枝杆菌甾酮C_(1,2)位脱氢酶的基因敲除[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前6条
1 李e灞颈ㄊ迪凹钦
本文编号：1050361
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/1050361.html
