松材线虫Bxpel2基因的克隆及RNA干扰载体构建

发布时间：2017-10-18 13:17

  本文关键词：松材线虫Bxpel2基因的克隆及RNA干扰载体构建

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【摘要】：[目的]为了构建松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)果胶酶Bxpel2基因干扰载体。[方法]通过Trizol法提取松材线虫总RNA,反转录合成c DNA,设计带T7启动子的果胶酶Bxpel2基因引物,以c DNA为模板扩增出果胶酶Bxpel2基因片段,连接到RNA干扰载体,再以干扰载体为模板,PCR扩增出目的片段后进行测序鉴定,合成果胶酶Bxpel2基因双链RNA(dsRNA),采用RT-PCR检测松材线虫Bxpel2基因干扰后的表达情况。[结果]表明:1)提取的松材线虫总RNA完整性好,无降解;2)成功克隆出松材线虫果胶酶Bxpel2基因片段(790 bp)并将其连接至p MD19-T载体;3)以RNA干扰载体为模板合成dsRNA,浓度分别为1.313 mg·m L-1和1.152 mg·m L-1;4)RT-PCR结果显示,松材线虫经过dsRNA干扰后,Bxpel2基因表达基本受到抑制。[结论]成功构建松材线虫果胶酶Bxpel2基因干扰载体,为进一步研究Bxpel2基因在松材线虫致病过程中的作用和功能奠定了良好的基础。
【作者单位】： 九江学院鄱阳湖生态经济研究中心;江苏省有害生物入侵预防与控制重点实验室南京林业大学林学院;
【关键词】： 松材线虫 Bxpel基因 RNA干扰
【基金】：国家“十二五”科技支撑专题“南方松林重大病虫综合控制技术集成与示范”(2012BAD19B0703)
【分类号】：S763.18
【正文快照】： 松材线虫病又称松树萎蔫病(Pine Wilt Dis-ease),是由松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus(SteinerBuhrer)Nickle)引起松属植物毁灭性死亡的一种世界性森林病害[1-3]。目前,松材线虫致病机制尚不清楚[4-5]。基因组学和分子生物技术的快速发展,为进一步研究松材线虫致病相关

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1 王明旭;松材线虫分子生物学检测技术研究进展[J];湖南林业科技;2004年02期

2 王继蓬,谢清云,华金林,张海滨;湖州局从美国木包装中截获松材线虫[J];植物检疫;2004年04期

3 李冰心,房德奎,李柄，

本文编号：1055127