黏液型铜绿假单胞菌耐药特征和耐药株相关基因型分析

发布时间：2017-10-22 19:02

  本文关键词：黏液型铜绿假单胞菌耐药特征和耐药株相关基因型分析

  更多相关文章： 黏液型铜绿假单胞菌 耐药 基因型 耐碳青霉烯类 亚胺培南 美罗培南 金属酶

【摘要】：背景:铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)是引起院内感染主要的革兰阴性杆菌,是人体最重要的条件致病菌之一,它可引起机体多系统,多脏器或多部位感染。假单胞菌感染的患者具有抗生素用药史周期长、复杂的特点,临床治疗难度极大。近年来,随着各种器械性和侵入性治疗手段的使用及抗菌药滥用,导致患者铜绿假单胞菌感染率及耐药率显著上升,如何有效治疗耐药的铜绿假单胞菌,是当今亟待解决的难题之一。研究发现根据菌落的形态特点,铜绿假单胞菌被划分为黏液和非黏液两种类型。铜绿假单胞菌的黏液化与生物膜形成有关,研究表明黏液型菌株比非黏液型定植更持久,感染更不易清除。此外,黏液型铜绿假单胞菌多分离于慢性、持续性感染患者,且黏液型铜绿假单胞菌的分离率远低于非黏液型。铜绿假单胞菌不同类型间经常会发生互相转化,黏液型有时可转变为非黏液型,特别对于新转变的黏液型容易转变为非黏液型。感染持续发展,转变成黏液型的菌株很难恢复成非黏液型。铜绿假单胞菌长期感染机体或长期在机体内潜伏容易产生耐药性,常规抗生素则很难将其彻底清除,当患者抵抗力降低很容易导致疾病发生。研究发现黏液型铜绿假单胞菌分泌的类似荚膜样物质,可与邻近细菌、血小板及纤维蛋白等聚集形成细菌生物膜,从而导致细菌铜绿假单胞菌不易与抗菌药直接接触而产生耐药性。此外,铜绿假单胞菌被膜阻碍机体免疫细胞或抗体与细菌的接触,导致细菌不易被清除。铜绿假单胞菌是一种特殊的菌株,容易对临床常用的多种抗生素产生耐药性,它的耐药机制非常复杂,涉及包括主动外排系统障碍、产生灭活酶或修饰酶及外膜渗透性降低等。外排系统通常借助细胞内的Mex B、Mex D和Mex E蛋白识别各种抗生素,然后抗生素与胞内的Mex A、Mex B和Opr M形成膜间运输通道,借助外膜Opr M、Opr J和Opr N形成通道将抗生素排出,进而导致机体对抗生素耐药。有报道指出抗菌药物的广泛使用可刺激细菌耐药基因发生改变或产生新的耐药基因,外膜蛋白Opr D2孔道是碳青霉烯类快速进入铜绿假单胞菌的绿色通道,Opr D2缺失或低表达常是导致铜绿假单胞菌对碳青霉烯类耐药的重要原因。碳青霉烯类抗生素是治疗耐药革兰阴性杆菌感染的最有效的药物之一,它也是防护机体损伤的最后防线。当前,碳青霉烯类抗生素是临床上治疗耐药铜绿假单胞菌最常见的有效药物,然而,随着碳青霉烯类抗生素在治疗铜绿假单胞菌的广泛使用,它对铜绿假单胞菌的耐药性越来越,有研究发现铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率甚至高达46.9%。铜绿假单胞菌的耐碳青霉烯类抗生素机制包括产生碳青霉烯酶、金属酶、外膜蛋白缺失及主动外排泵等诸多方面。迄今,不同基因型黏液型铜绿假单胞菌与药物耐药性的关系及机制,尚不清楚。目的:本文通过探讨携带不同基因型黏液型铜绿假单胞菌与抗生素耐药性的相关性,旨在为临床合理使用抗生素治疗携带不同基因型黏液型铜绿假单胞菌提供理论参考。方法:菌株来源110株黏液型铜绿假单胞菌,分离于2012年01月-2015年12月来中国人民解放军202医院各科室就诊的患者标本。其中,来自痰标本100株,来自脓液及分泌物8株,来源于其他标本2株。菌株鉴定采用常规鉴定法进行菌株鉴定。标本培养、分离严格按照《全国临床检验操作规程》进行。黏液型铜绿假单胞菌菌落形态多样,无色,可见粘稠状、露滴状及胶冻状菌落、菌落边缘不规则。用接种环挑起无金属光泽、无特殊气味的菌落,分纯后所有菌株鉴定经Vitek2 Compact全自动微生物分析仪鉴定为铜绿假单胞菌,并进行复测。药敏试验纸片法测定10种常用抗生素做敏感性试验。按照CLISM100-22实施。质控菌株为铜绿假单胞菌ATCC27853。恒温35℃24h记录第一次药敏结果,48h记录第二次药敏结果,第72h记录第三次药敏结果。敏感性试验结果参照美国临床实验室标准委员会2011标准进行判读。(药敏纸片规格如下:亚胺培南10ug、阿米卡星30ug、妥布霉素10ug、庆大霉素10ug、头孢吡肟30ug、哌拉西林/他唑巴坦100/10ug、左氧氟沙星5ug、头孢他啶30ug、环丙沙星5ug、美罗培南10ug。)PCR方法针对耐碳青霉烯类抗生素不同基因设计特异性引物,避免在3’端产生互补序列和发夹结构,引物特异性检验采用NCBI数据库中Blast进行匹配分析。采用聚合酶链反应(PCR)扩增Amp C、IMP-1、SPM-1、Opr D、KPC、VIM-1和VIM-2基因。取PCR产物20μl与2ul溴酚蓝混匀于2%琼脂糖凝胶电泳分离,溴化乙锭染色5min后,紫外凝胶成像系统观察DNA条带。统计分析采用Spss18.0软件进行卡方检验或Fisher’s精确检验,所有统计检验均为双侧概率检验,P0.05差异有统计学意义。结果:黏液型铜绿假单胞菌对抗生素的耐药结果结果发现24h黏液型铜绿假单胞菌对阿米卡星、妥布霉素、庆大霉素、哌拉西林/他唑巴坦、左氧氟沙星、头孢他啶的耐药率在0~4.5%,而对亚胺培南、美罗培南、头孢吡肟和环丙沙星的耐药率为7.3~9.1%。与24h药敏结果相比,48h黏液型铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率均为13.6%,而对阿米卡星、妥布霉素、庆大霉素、头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦、左氧氟沙星和头孢他啶的耐药率在敏感性在6.4~11.8%,差异有统计学意义(P0.05)。与48 h药敏结果相比,72 h黏液型铜绿假单胞菌对上述抗生素的耐药率差异不显著(P0.05)。不同基因型粘液铜绿假单胞菌与耐药性的关系结果发现,其中携带Amp C阳性基因的菌株有12株(80.00%),携带IMP-1阳性基因菌株2株(13.33%),携带VIM-1阳性基因菌株有5株(33.33%),携带VIM-2阳性基因菌株有9株(60.00%),携带Opr D2阳性基因菌株有4株(26.67%),携带Opr D2阴性基因为11株(73.33%),携带SPM-1阳性基因菌株有4株(26.67%),携带KPC阳性基因菌株5株(33.33%)。结论:不同时间检测的黏液型铜绿假单胞菌对不同抗生素的耐药率显著不同,特别对耐碳青霉烯类抗生素亚胺培南和美罗培南存在明显的耐药性;黏液型铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类抗生素机制与Amp C、VIM-2和Opr D2基因密切相关。
【关键词】：黏液型铜绿假单胞菌 耐药 基因型 耐碳青霉烯类 亚胺培南 美罗培南 金属酶
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R446.5
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 中英文缩略词对照表12-13
• 第1章 绪论13-15
• 第2章 材料与方法15-19
• 2.1 菌株来源15
• 2.2 主要试剂15
• 2.3 主要仪器设备15-16
• 2.4 抗菌药物16
• 2.5 菌株鉴定16
• 2.6 细菌DNA的提取16
• 2.7 引物设计16-18
• 2.8 药敏试验18
• 2.9 统计分析18-19
• 第3章 结果19-25
• 3.1 黏液型铜绿假单胞菌对抗生素的耐药结果19-20
• 3.2 不同基因型粘液铜绿假单胞菌与耐药性的关系20-25
• 第4章 讨论25-28
• 第5章 结论28-29
• 参考文献29-34
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果34-35
• 致谢35

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 林晓 ,陈美云 ,林其昌 ,陈公平;222株铜绿假单胞菌药敏结果[J];现代医药卫生;2002年10期

2 王炳华;王炳云;;106株铜绿假单胞菌药敏结果分析[J];基层医学论坛;2004年06期

3 黄志强;李丽君;卢娟;;肺结核病合并感染铜绿假单胞菌的药敏分析[J];临床肺科杂志;2010年09期

4 封尊玉;;铜绿假单胞菌的治疗策略[J];海南医学;2010年21期

5 刘萍;张志伦;倪丹妮;吴杰红;;铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶因素分析[J];中华医院感染学杂志;2011年23期

6 吴丽娟,熊尔阳,邓光贵;聚合酶链反应检测铜绿假单胞菌的研究现状[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;1996年06期

7 周铁丽,曹建明;一种鉴定铜绿假单胞菌的新方法[J];陕西医学检验;1997年04期

8 朱小平;78株铜绿假单胞菌药敏结果的初步探讨[J];江苏临床医学杂志;1999年05期

9 孙东华,边瑞岩,孙跃军,王庆敏;铜绿假单胞菌污染矿泉水调查分析[J];环境与健康杂志;2000年04期

10 张文英;86株铜绿假单胞菌的耐药调查[J];华夏医学;2000年04期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 方莉;许媛;黄义山;蔡燕;唐中;杨明辉;廖涛;;铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶基因的检测[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年

2 周明明;周铁丽;李超;吴庆;陈栎江;吴莲凤;彭定辉;;主动外排在铜绿假单胞菌耐药中的作用研究[A];2009年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2009年

3 陈邦;王琰;苟晓峰;陈林;;嘧霉胺对铜绿假单胞菌基因的调节[A];第六届全国化学生物学学术会议论文摘要集[C];2009年

4 朱丹;李欣;;对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌的体外药敏分析[A];2005年浙江省呼吸系病学术年会论文汇编[C];2005年

5 洪波;贡联兵;;铜绿假单胞菌对亚胺培南的药敏分析[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年

6 徐海茹;田彬;岳娜;胡志东;;临床分离的铜绿假单胞菌耐药结果分析[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年

7 赵书平;姜梅杰;;神经内科重症监护室铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因研究[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年

8 张杜超;方向群;;微重力对铜绿假单胞菌毒力影响及与肺部感染关系[A];2011年空间生命与生命起源暨航天医学工程学术研讨会论文集[C];2011年

9 李春梅;钟晓祝;;铜绿假单胞菌医院感染监测分析[A];中华预防医学会消毒分会学术年会论文汇编[C];2010年

10 熊娟;梁丽红;;尿液中分离出产红脓素的铜绿假单胞菌[A];2012全国临床微生物与感染免疫学术研讨会论文集[C];2012年

中国重要报纸全文数据库 前5条

1 浙江大学医学院附属第一医院 俞云松;铜绿假单胞菌耐药全国流行[N];健康报;2008年

2 李曙平;铜绿假单胞菌 老年病房的主要致病菌[N];中国中医药报;2003年

3 王振岭;铜绿假单胞菌耐药问题严重[N];中国医药报;2002年

4 天津医科大学总医院检验科 胡志东;关注铜绿假单胞菌对碳青霉烯类药物的耐药[N];健康报;2009年

5 ;碳青霉烯类抗生素[N];农村医药报（汉）;2007年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 张瑞琴;氟喹诺酮类药物诱导铜绿假单胞菌耐药性及分子机制的研究[D];山西医科大学;2015年

2 曹振辉;铜绿假单胞菌裂解性噬菌体的筛选、鉴定及应用[D];大连理工大学;2015年

3 苏甜甜;铜绿假单胞菌鞭毛及生物膜调控蛋白FleQ和糖苷水解酶PslG的结构与功能研究[D];山东大学;2015年

4 张明亮;铜绿假单胞菌F_(190-342)-I_(21-83)基因重组鼠伤寒沙门菌的构建及实验免疫研究[D];吉林大学;2015年

5 蔡双启;铜绿假单胞菌对头孢哌酮钠/舒巴坦钠的耐药变迁及差异蛋白组学和比较基因组学研究[D];广西医科大学;2016年

6 张若文;烧伤病房耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌耐药机制及分子流行病学研究[D];吉林大学;2012年

7 张亚妮;谷胱甘肽与铜绿假单胞菌致病性及抗生素抗性的关系研究[D];西北大学;2009年

8 陈林;铜绿假单胞菌内在耐药性相关基因的筛选及研究[D];西北大学;2010年

9 李学如;铜绿假单胞菌耐喹诺酮类药物的分子机制研究[D];四川大学;2003年

10 徐洋洋;铜绿假单胞菌致病性受信号分子调控及其机理研究[D];西北大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 吴苏敏;光动力疗法抗多重耐药铜绿假单胞菌感染的研究[D];中国人民解放军医学院;2015年

2 贾子中;黄连素对烧伤创面铜绿假单胞菌生物膜干预试验及自制中药临床应用观察[D];内蒙古大学;2015年

3 王颖;新型抗耐药革兰氏阴性菌药物的筛选研究[D];北京协和医学院;2015年

4 马超;无机镓化合物抗菌性能研究[D];西南交通大学;2015年

5 李九龙;PA0861在铜绿假单胞菌PAO1中作用的研究[D];宁夏医科大学;2015年

6 梁红梅;铜绿假单胞菌ATCC27853对秀丽隐杆线虫的毒性研究[D];兰州大学;2015年

7 胡凡;铜绿假单胞菌的耐药表型与耐药基因型研究[D];河北农业大学;2015年

8 王国旗;负压创面疗法治疗铜绿假单胞菌感染创面的相关机制研究[D];中国人民解放军医学院;2015年

9 饶慧华;clpP基因在铜绿假单胞菌毒力中的作用[D];福建医科大学;2015年

10 姚远;乳酸钠抑制铜绿假单胞菌的优化建模及其对猪肉持水力和蛋白质的影响[D];上海理工大学;2013年

，

本文编号：1079649