节瓜抗镰刀菌酸突变体内切几丁质酶基因的克隆与植物表达载体构建

发布时间：2017-10-25 01:15

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【摘要】：根据节瓜与枯萎病菌互作构建抑制消减文库获得的内切几丁质酶基因EST序列,以节瓜抗镰刀菌酸突变体"LT3"为试材,通过RT-PCR与RACE相结合的方法,获得了该基因全长c DNA序列,命名为Cq Chi I。序列测定和生物信息学分析结果表明,该基因c DNA序列全长1 139 bp,编码区在38~982 bp之间,编码314个氨基酸,蛋白质分子量为33.94 ku,等电点为8.43,具有chitinase_gluco_hydro_19及lysozome_like superfamily功能域,推测该蛋白可能兼具几丁质酶与溶菌酶活性。结构分析表明,该蛋白二级结构中α螺旋、延伸链、β转角与无规则卷曲分别占24.20%、18.15%、7.96%和49.68%,该蛋白为亲水性非跨膜蛋白,1~23氨基酸预测为信号肽。其三级结构高度保守,为class I碱性几丁质酶,属于几丁质酶第19家族,为分泌细胞外蛋白。序列比对与系统进化分析结果显示,Cq Chi I与黄瓜、甜瓜、葫芦、苦瓜等植物几丁质酶基因亲缘关系紧密,与黄瓜碱性内切几丁质酶(XP004134833)相似性最高为85%。进一步构建了植物表达载体p Cambia1300并转化农杆菌EHA105,通过蘸花法转化拟南芥,为后续开展基因功能研究奠定基础。
【作者单位】： 广东省农业科学院蔬菜研究所;
【关键词】： 节瓜 抗镰刀菌酸突变体 内切几丁质酶基因 c DNA克隆 植物表达载体
【基金】：国家自然科学青年基金(No.31311643) 广东省自然科学基金(No.10451064001006063) 广州市珠江科技新星项目(No.2013086)
【分类号】：S436.429
【正文快照】： 节瓜枯萎病是限制节瓜(Benincasa hispida Cogn.var.Chieh-qua How)生产的最重要因子之一,该病害由镰刀菌节瓜专化型(Fusarium oxyrum sp.Chieh-qua)引起,整个生育期均可发病,发病植株叶片变黄萎蔫至整株枯死。华南地区节瓜枯萎病田间发病率通常为30%左右,严重时可达70%以上,

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