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胃癌细胞株BGC-823中miR-138-5p负性调控Sirt1基因的表达

发布时间:2017-10-25 04:07

  本文关键词:胃癌细胞株BGC-823中miR-138-5p负性调控Sirt1基因的表达


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【摘要】:目的在胃癌细胞中筛选并鉴定靶向Sirt1基因的micorRNA。方法生物信息学软件预测特异性靶向Sirt1基因3’端非编码区域(3′-UTR)的microRNA;分别构建野生型和突变型与目的 microRNA匹配的Sirt1基因3′-UTR序列双荧光素酶报告基因载体;将miR-138-5p过表达质粒分别与野生型和突变型双荧光素酶报告基因载体共转染入胃癌细胞株BGC-823中,应用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。miR-138-5p过表达质粒转染BGC-823细胞,荧光定量PCR检测转染细胞miR-138-5p与Sirt1 mRNA的表达,Western blot检测SIRT1蛋白的表达。结果生物信息学软件预测显示miR-138-5p为靶向调控Sirt1的候选micro RNA;成功构建野生型和突变型Sirt1基因3′-UTR双荧光素酶报告基因载体;荧光素酶活性实验表明,miR-138-5p可以下调野生型质粒的荧光素酶活性,不影响突变型质粒的荧光素酶。miR-138-5p过表达质粒转染后的BGC-823细胞中,miR-138-5p表达显著上调,Sirt1基因mRNA和蛋白的表达水平明显下调。结论在胃癌细胞中miR-138-5p靶向作用于Sirt1基因3′-UTR,并负性调控Sirt1基因。
【作者单位】: 宁夏医科大学基础医学院病原生物学与医学免疫学系;宁夏回族自治区第三人民医院;
【关键词】microRNA--p Sirt 负性调控 人胃癌BGC-细胞系
【基金】:国家自然科学基金(861260314)
【分类号】:R735.2
【正文快照】: 沉默信息调节因子1(silent information regu-lator 1,Sirt1)作为一种依赖于烟碱腺嘌呤二核苷酸(nicotine-amid adenine dinucleotide,NAD)的去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)广泛存在于哺乳动物细胞质和细胞核中。Sirt1及其同源基因在细胞的生存、凋亡、肿瘤的发生发展

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本文编号:1091978


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