独行菜磷酸甲羟戊酸激酶LaPMK基因克

发布时间：2017-10-28 17:22

  本文关键词：独行菜磷酸甲羟戊酸激酶LaPMK基因克隆、生物信息学分析及原核表达

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【摘要】：目的从独行菜Lepidium apetalum中克隆萜类合成途径关键酶磷酸甲羟戊酸激酶(phosphomevalonate kinase,PMK)基因,进行序列分析和原核表达。方法根据独行菜转录组数据中La PMK基因序列设计特异性引物,克隆得到La PMK基因的开放阅读框(open reading frame,ORF),构建p ET32a-La PMK原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达La PMK融合蛋白。结果 La PMK基因ORF全长为1 518 bp(Genbank注册号KT004541),编码505个氨基酸。生物信息学分析结果显示La PMK蛋白没有跨膜区,不含信号肽,位于细胞质中,含有GHMP激酶家族特异的N末端和C末端的保守结构域。系统进化树结果显示La PMK蛋白与芜菁的PMK蛋白具有92%的序列相似性,亲缘关系较近。构建p ET32a-La PMK原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达La PMK融合蛋白。结论克隆了La PMK基因,建立其稳定的原核表达体系,为La PMK蛋白纯化、抗体的制备,进一步研究La PMK基因在独行菜萜类合成途径中的作用奠定了基础。
【作者单位】： 河南中医学院药学院;呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心;
【关键词】： 独行菜 磷酸甲羟戊酸激酶 萜类合成 基因克隆 原核表达
【基金】：国家重点基础研究发展计划“973计划”项目(2013CB531802) 河南中医学院博士科研基金(BSJJ2011-07)
【分类号】：S567.2
【正文快照】： 独行菜Lepidium apetalum Willd.为十字花科(Cruciferae)独行菜属Lepidium L.植物,其成熟种子为传统中药北葶苈子,具有泻肺平喘、利水消肿、强心之功效,含有强心苷、黄酮、三萜、甾醇、香豆素、生物碱、酚酸、挥发油等多种成分,对心血管、高血脂等疾病具有显著功效,具有降压、

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本文编号：1109228