重组猪细小病毒VP2基因的猪伪狂犬病毒rPRV-VP2株的构建及纯化

发布时间：2017-11-02 23:00

  本文关键词：重组猪细小病毒VP2基因的猪伪狂犬病毒rPRV-VP2株的构建及纯化

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【摘要】：参考GenBank中登录的猪细小病毒(PPV)(M38367.1)基因序列,设计1对可以扩增出约1.6kb PPV VP2基因片段的特异性引物,上、下游引物的5′端均引入BamHⅠ酶切位点,PCR扩增得到VP2目的片段后,连接到pMD18-T载体中得到重组质粒pMD-VP2。取本实验室构建的含绿色荧光蛋白标记基因的伪狂犬病毒(PRV)通用转移质粒pG和构建好的pMD-VP2质粒,用BamHⅠ对质粒pG和pMD-VP2进行酶切,然后用CIAP对酶切产物进行去磷酸化处理,纯化回收后将VP2基因插入pG质粒中获得重组伪狂犬病毒转移质粒pGVP2。用脂质体转染法将PRV HB-98株全基因组与质粒pGVP2共转染ST细胞,得到携带有PPV VP2外源抗原基因和绿色荧光蛋白标记基因的重组伪狂犬病毒rPRV-VP2株。结合VP2基因PCR扩增和绿色荧光观察,经5轮病毒空斑纯化得到了纯化的重组病毒rPRV-VP2株。
【作者单位】： 河南农业大学郑州市猪重大疾病防控重点实验室;郑州师范学院;
【关键词】： PRV 猪细小病毒 VP基因 重组
【基金】：河南省重大科技专项资助项目(111100110300)
【分类号】：S852.65
【正文快照】： *Corresponding author,E-mail:chhy927@163.com猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)属于细小病毒科、细小病毒属成员[1],是引发猪繁殖障碍的重要病原体之一,该病原体主要引起母猪尤其是初产妊娠母猪发生流产、死胎和木乃伊胎、而母猪本身往往无明显临床症状。本病在世界范围

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本文编号：1133519