小反刍兽疫全基因序列分析与核衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达

发布时间：2017-11-03 21:08

  本文关键词：小反刍兽疫全基因序列分析与核衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达

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【摘要】：小反刍兽疫(Pest des petits ruminants,PPR)是由小反刍兽疫病毒(Pest des petits ruminants virus,PPRV)引起的烈性传染病,其病毒主要危害山羊、绵羊等小反刍兽,以突然发病、高热稽留、口疮、流鼻涕、腹泻等主要病症,因其发病率和死亡率高,传播速度快,被世界动物卫生组织(The World Organisation for Animal Health,OIE)列为A类烈性重大传染病之一。小反刍兽疫病毒于2007年7月在我国西藏首次发现,相继在2013年新疆伊犁大爆发,引起大批量的山羊、绵羊死亡,给养殖户带来巨大损失。随后在我国20多个省、市大量流行、传播。各地的有关部门也重视了该病毒的危害性,积极采取措施预防。笔者于2014年春季在广东省某羊场送检的样本中首次检测到了小反刍兽疫病毒,并把该毒株命名为CH/GDDG/2014。本研究对其全基因组特征、N基因抗原活性等进行了研究,有助于了解小反刍兽疫病毒的分子流行病学,也为小反刍兽疫病毒的诊断研究奠定基础。本研究内容及结果如下:1.本研究利用RT-PCR分11段重叠cDNA扩增小反刍兽疫病毒基因全长序列获得PPRV全基因组,并命名为CH/GDDG/2014株,经序列测定与GenBank中收录的23条小反刍兽疫参考毒株的序列进行核苷酸同源性分析,构建系统进化树。结果显示CH/GDDG/2014株基因组含有15954个核苷酸,获得的全长序列比国外分离的毒株要多6个核苷酸(TCCCTC),由于这6个核苷酸的插入可能导致病毒滴度降低,对细胞的培养造成一定的困难。该基因组包括六个开放阅读框(ORFs)分别编码核衣壳蛋白,磷蛋白,基质蛋白,融合蛋白,血凝素,和大聚合酶蛋白。与参考株之间的核苷酸同源性为87.2%?99.8%,其中发现CH/GDDG/2014株与China/XJYL/2013株同源性最高(99.8%),与KN5/2011同源性最低(87.2%)。小反刍兽疫病毒CH/GDDG/2014株与国内近2年的小反刍兽疫病毒毒株均在系统进化树上处于同一分支,而与国外毒株处于不同分支。进一步表明目前国内流行的小反刍病毒亲缘关系较近,且主要以IV系流行。构建了PPRV的全长cDNA为拯救PPRV奠定了基础。2.本研究成功构建了小反刍兽疫N基因的重组穿梭质粒pFastBac-PPRV-N,经测序正确,转化到DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,经过蓝白斑筛选转座后获得重组杆状病毒杆粒Bacmid-PPRV-N,转染生长良好的Sf9细胞,获取重组杆状病毒。通SDS-PAGE和WB鉴定N的蛋白的表达,且鉴定的条带与预期的相符。
【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.65

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