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葡萄糖苷酶的性质和功能研究及基因表达谱分析

发布时间:2016-09-12 13:22

  本文关键词:斜卧青霉β-葡萄糖苷酶的性质和功能研究及基因表达谱分析,由笔耕文化传播整理发布。


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斜卧青霉β-葡萄糖苷酶的性质和功能研究及基因表达谱分析

 

     论文目录

 

摘要第1-11页

ABSTRACT第11-16页

符号说明及縮略词第16-18页

第一章 绪论第18-42页

   ·β-葡萄糖苷酶第18-26页

     ·β-葡萄糖苷酶的分类第19页

     ·β-葡萄糖苷酶的结构第19-20页

     ·β-葡萄糖苷酶的催化机理第20-21页

     ·β-葡萄糖苷酶的底物特异性第21-22页

     ·β-葡萄糖苷酶的理化性质第22-23页

     ·β-葡萄糖苷酶在生物乙醇生产中的应用第23-26页

   ·丝状真菌木质纤维素酶的合成调控机制研究进展第26-34页

     ·碳源对纤维素酶的诱导作用第26-29页

     ·β-葡萄糖苷酶在真菌纤维素酶合成调控中的作用第29-31页

     ·木质纤维素酶的转录水平调控第31-33页

     ·其它因素对木质纤维素酶合成调控的影响第33-34页

   ·木质纤维素降解酶合成调控机制的转录组学研究第34-40页

     ·里氏木霉木质纤维素酶合成调控机制的研究进展第35-36页

     ·粗糙脉孢菌木质纤维素酶合成调控机制的研究进展第36-38页

     ·曲霉木质纤维素酶合成调控机制的研究进展第38-40页

   ·本论文的立题依据和研究内容第40-42页

第二章 胞外主要β-葡萄糖苷酶BGL1的性质及在木质纤维素酶合成调控中的功能研究第42-71页

 引言第42-43页

   ·材料和方法第43-53页

     ·菌株、培养基和培养方法第43-44页

     ·常用储备液第44-45页

     ·常用试剂与仪器第45页

     ·基因组DNA与总RNA的提取第45-46页

     ·β-葡萄糖苷酶基因bgl1的克隆第46页

     ·胞外β-葡萄糖苷酶的聚丙烯葡聚糖凝胶层析第46页

     ·β-葡萄糖苷酶酶活力的测定第46-47页

     ·蛋白浓度的测定和SDS-PAGE分析第47页

     ·温度和pH对酶活力的影响第47页

     ·pBGL1的反应动力学分析第47-48页

     ·β-葡萄糖苷酶的添加对里氏木霉QM9414酶液糖化能力的影响第48页

     ·胞外主要β-葡萄糖苷酶BGL1缺失菌株Δbgl1的构建第48-50页

     ·敲除株的验证第50-51页

     ·Δbgl1的表型分析第51页

     ·胞外木质纤维素酶活力测定第51页

     ·纤维糊精的制备第51-52页

     ·Δbgl1中木质纤维素酶基因转录水平的测定第52-53页

     ·胞内纤维寡糖含量的测定第53页

   ·结果与讨论第53-69页

     ·斜卧青霉114-2 BGL1的氨基酸序列分析第53-54页

     ·斜卧青霉114-2 BGL1的分离纯化第54-56页

     ·pBGL1的酶学性质第56-58页

     ·β-葡萄糖苷酶的添加对里氏木霉QM9414发酵液糖化能力的影响第58-61页

     ·BGL1在斜卧青霉114-2中的敲除第61-62页

     ·Δbgl1的表型分析第62-63页

     ·BGL1的缺失对胞外蛋白分泌及木质纤维素酶活力的影响第63-65页

     ·BGL1的缺失对木质纤维素酶基因转录水平的影响第65-69页

 小结第69-71页

第三章 胞内主要β-葡萄糖苷酶BGL2的性质及在木质纤维素酶合成调控中的功能研究第71-103页

 引言第71-72页

   ·材料和方法第72-80页

     ·菌株和培养基第72页

     ·常用的储备液以及缓冲液第72页

     ·胞内β-葡萄糖苷酶基因缺失菌株的构建第72-75页

     ·bgl2的原位回补第75-76页

     ·蛋白浓度及木质纤维素酶活力的测定第76页

     ·Δbgl2纤维素酶基因转录水平测定第76页

     ·Δbgl2胞内纤维二糖浓度的测定第76页

     ·Δbgl1基因的克隆第76-77页

     ·Δbgl2表达载体的构建第77页

     ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第77-78页

     ·重组蛋白在E.coli BL21中的异源表达第78-79页

     ·重组蛋白的分离纯化第79页

     ·pH和温度对重组蛋白酶活力的影响第79页

     ·重组蛋白对纤维寡糖的水解作用第79-80页

     ·重组BGL2的转糖基作用检测第80页

   ·结果与讨论第80-101页

     ·斜卧青霉114-2胞内的β-葡萄糖苷酶第80-81页

     ·胞内β-葡萄糖苷酶在斜卧青霉114-2中的敲除第81-83页

     ·敲除株产纤维素酶能力的测定第83-85页

     ·BGL2的缺失对胞外蛋白和木质纤维素酶合成能力的影响第85-91页

     ·BGL2的缺失对纤维素条件下木质纤维素酶基因转录的影响第91-92页

     ·纤维二糖浓度对敲除株木质纤维素酶基因转录水平的影响第92-94页

     ·BGL2的氨基酸序列分析第94页

     ·BGL2在E.coli BL21中的异源表达第94-96页

     ·重组BGL2的分离纯化第96-97页

     ·重组BGL2的性质分析第97-101页

 小结第101-103页

第四章 BGL1和BGL2双缺菌株中木质纤维素酶合成调控机制的研究第103-118页

 引言第103-104页

   ·方法和材料第104-106页

     ·菌株、培养基和培养条件第104页

     ·BGL1和BGL2双敲除菌株Δbgl1Δbgl2的构建第104-105页

     ·Δbgl1Δbgl2的表型分析第105页

     ·Δbgl1Δbgl2的产酶能力测定第105页

     ·Δbgl1Δbgl2纤维素酶基因转录水平测定第105页

     ·Δbgl1Δbgl2胞内纤维二糖浓度的测定第105-106页

   ·结果与讨论第106-116页

     ·β-葡萄糖苷酶双敲除菌株△bgl1Δbgl2的构建第106-107页

     ·Δbgl1Δbgl2的表型分析第107-109页

     ·β-葡萄糖苷酶的缺失对木质纤维素酶活力的影响第109-111页

     ·β-葡萄糖苷酶的缺失对木质纤维素酶基因转录水平的影响第111-113页

     ·纤维二糖代谢相关基因的转录水平检测第113-114页

     ·不同二糖对斜卧青霉纤维素酶的诱导作用第114-115页

     ·斜卧青霉β-葡萄糖苷酶影响纤维素酶调控模型预测第115-116页

 小结第116-118页

第五章 斜卧青霉114-2及高产突变株的基因表达谱差异分析第118-136页

 引言第118-119页

   ·材料与方法第119-121页

     ·菌株、培养基及培养条件第119页

     ·常用溶液和试剂第119-120页

     ·RNA样品的准备及测序第120-121页

     ·差异表达基因的筛选第121页

     ·差异表达基因的分级聚类分析第121页

     ·差异表达基因的GO功能富集分析第121页

   ·结果与分析第121-134页

     ·斜卧青霉野生菌株114-2在不同条件下的转录差异分析第121-126页

     ·斜卧青霉突变株JU-A10-T在不同条件下的转录差异分析第126-130页

     ·野生菌株114-2与突变株JU-A10-T的转录差异分析第130-134页

 小结第134-136页

论文创新性结果总结与展望第136-138页

参考文献第138-157页

攻读学位期间发表的学术论文第157-158页

致谢第158-159页

附录第159-173页

附件第173页


 

论文编号BS1903216,这篇论文共173页
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本文编号:114207

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