刚地弓形虫ROP16基因的克隆及生物信息学分析
本文关键词:刚地弓形虫ROP16基因的克隆及生物信息学分析
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【摘要】:目的构建刚地弓形虫棒状体蛋白16(TgROP16)真核重组表达载体,对TgROP16基因编码蛋白进行生物信息学分析。方法提取刚地弓形虫总RNA,根据TgROP16基因的开放阅读框架设计引物,采用逆转录PCR(RTPCR)扩增ROP16基因,经EcoR I、Not I酶切后连接入真核表达载体pVAX1中,连接产物转化大肠埃希菌(E.coli)XL1-Blue。提取阳性菌落质粒,进行PCR、双酶切鉴定及基因测序,对所获序列进行生物信息学分析。结果 TgROP基因RT-PCR扩增产物与预期一致,大小约为2 100bp。重组质粒经PCR及双酶切鉴定构建正确。测序显示获得的TgROP16基因片段为2 124bp,与GenBank已收录的弓形虫ROP16基因序列(登录号为GQ249093.1)比对,一致性为99.8%。预测其编码蛋白TgROP16为非跨膜分泌蛋白,含707个氨基酸,分子式为C3343H5339N967O1024S2,分子质量单位为76.1352ku,理论等电点为9.18;在TgROP16蛋白的二级结构中α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲分别占比35.79%、14.29%、7.07%和42.86%;含多个可形成卷曲螺旋构象的区域与可成为磷酸化位点的氨基酸残基,存在信号肽序列,含39个B细胞抗原表位、24个CTL细胞抗原表位及33个Th细胞抗原表位。结论成功构建了pVAX1-ROP16真核表达重组质粒,生物信息学分析表明其编码蛋白TgROP16具有良好的抗原性及免疫原性,有望作为弓形虫疫苗候选分子。
【作者单位】: 河北北方学院病原生物学与免疫学研究所;
【基金】:河北北方学院校级重大课题(No.ZD201312)
【分类号】:R382.5
【正文快照】: ***动物中的大多数种属,有超过30种鸟类和300种哺乳动物被感染,以人类的感染多见[1]。孕妇早期感染怀刚地弓形虫孕可导致流产或死胎,存活胎儿也可出现脉络膜视网膜炎、脑积水、头小畸形、颅内钙化等异常。T细胞缺陷如器官移植受者、AIDS患者、恶性血液病患者、免疫治疗法接受
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,本文编号:1151402
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