斧文蛤金属硫蛋白基因的克隆与表达分析

发布时间：2017-11-12 01:09

  本文关键词：斧文蛤金属硫蛋白基因的克隆与表达分析

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【摘要】：金属硫蛋白(Metallothionein,MT)是一类富含半胱氨酸的小分子蛋白质,参与机体重金属解毒、维持金属元素代谢平衡以及清除自由基等生理功能。为了解斧文蛤金属硫蛋白(Ml-MT)的分子生物学特征及其在重金属Cd~(2+)胁迫下的响应机制,本文采用RACE技术从斧文蛤(Meretrix lamarckii)总RNA反转录产物中获得了636 bp的Ml-MT c DNA基因序列。该序列包含65 bp的5′非编码区(UTR)和340 bp的3′非编码区(UTR)以及231 bp的开放阅读框(ORF),可编码76个氨基酸;其中半胱氨酸占27%,不含芳香族氨基酸,含16个MT所特有的Cys-Xn-Cys结构,预测的分子量约为7.704 k D,理论等电点7.138。MT氨基酸序列比对分析表明:斧文蛤金属硫蛋白(Ml-MT)与丽文蛤(Meretrix lusoria)的相似性高达88%,与文蛤(Meretrix meretrix)的同源性为87%。实时荧光定量(q RT-PCR)检测MT在斧文蛤5种组织中均有表达,但存在组织特异性,其中内脏团表达量最高,其次依次为鳃丝、闭壳肌、外套膜、斧足。在Cd~(2+)(0.13 mg/L)胁迫0、6h、12h、24h、48h、72h和96h下,斧文蛤内脏团MT呈现出不同程度的上调表达,具体表现为"高-低-高-低"的波浪式变化,除6h以外,其他时间点均与对照组存在极显著差异(P0.01)。本研究表明:MT基因在维护机体正常生理功能及斧文蛤抵御重金属Cd~(2+)胁迫过程中发挥着重要的分子调控作用。
【作者单位】： 浙江省海洋水产养殖研究所;浙江省近岸水域生物资源开发与保护重点实验室;上海海洋大学水产与生命学院;温州医科大学检验医学院生命科学学院;浙江大学动物科学学院;
【基金】：海洋公益性行业科研专项(201205021-5) 国家贝类产业技术体系(CARS-48) 国家自然科学基金面上项目(31372503) 水产种质资源平台运行服务(2015DKA30470)资助~~
【分类号】：S917.4
【正文快照】： 斧文蛤(Meretrix lamarckii)隶属于瓣鳃纲(Lamellibranchia)、帘蛤目(Veneroida)、帘蛤科(Veneridae)、文蛤属(Meretrix),是我国沿海重要的海水经济贝类种类之一[1]。斧文蛤营埋栖型生活、靠滤水进行呼吸及取食[2,3],因此可能极易受到环境重金属的污染胁迫。金属硫蛋白(Metall

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本文编号：1173659