分枝杆菌表达质粒的快速构建及ClpC2基因功能初步研究

发布时间：2017-11-12 20:22

  本文关键词：分枝杆菌表达质粒的快速构建及ClpC2基因功能初步研究

  更多相关文章： FspEⅠ内切酶 耻垢分枝杆菌 Clp C基因 免疫原性

【摘要】：目的通过一种不受到序列限制、酶切连接反应一步进行的分子克隆方法,构建分枝杆菌Clp C2重组表达质粒,检测其在耻垢分枝杆菌中的蛋白表达并对其功能进行初步探讨。方法利用识别甲基化位点的内切酶Fsp EⅠ进行一步法酶切、连接反应,构建重组质粒PMV261(+)-Clp C2。将重组质粒转入耻垢分枝杆菌,利用SDS-PAGE和Western blot检测Clp C2基因在耻垢分枝杆菌中的表达以及氧化应激、酸应激对其功能进行初步探讨。结果利用Fsp EⅠ快速构建了分枝杆菌表达质粒Clp C2,将其成功电转至耻垢分枝杆菌中,SDS-PAGEA和Western blot检测其蛋白的表达,His单抗和兔多抗均能检测到目的条带,Mr大小27 570。氧化应激及酸应激实验表明Clp C2重组耻垢分枝杆菌与空载耻垢分枝杆菌在对抗应激方面无明显差异。结论成功构建了一种不受序列限制的分子克隆方法以及分枝杆菌Clp C2重组表达质粒,Western blot表明其具有一定的免疫原性,氧化应激及酸应激表明Clp C2重组耻垢分枝杆菌对抗应激方面无明显改变,为进一步深入研究Clp C2基因的功能奠定了基础。
【作者单位】： 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心病原生物学教研室;重庆医科大学附属第一医院呼吸内科;
【基金】：重庆市教委科学技术研究项目(KJ1500203)
【分类号】：R392
【正文快照】： 结核病(Tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的世界性疾病,目前仍然是影响人体健康的最重要传染性疾病之一[1]。全球结核携带者约为总人数的1/3,每年新 发结核病例约900万人,将近200万人死于结核病。而我国也是世界上22个结核病高负担国家

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本文编号：1177455