砷对巨噬细胞和肝细胞胆固醇流出及相关基因ABCA1和ABCG1表达的影响

发布时间：2017-11-15 18:04

  本文关键词：砷对巨噬细胞和肝细胞胆固醇流出及相关基因ABCA1和ABCG1表达的影响

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【摘要】：目的：流行病学和动物实验结果均显示砷暴露是血脂异常和动脉粥样硬化的危险因子,胆固醇外流的主要通道蛋白腺三磷结合盒转运体A1(ABCA1)、ABCG1和清道夫受体BI(SR-BI)是维持体内胆固醇稳态的关键因子,在抗动脉粥样硬化形成中发挥关键作用,但砷对胆固醇流出及相关通道基因的影响并不很清楚。本研究的目的是为了明确砷对巨噬细胞和肝细胞胆固醇流出率及胆固醇流出通道基因表达的影响,为阐明砷导致血脂异常及与动脉粥样硬化的发生机制提供理论依据。方法：THP-1及小鼠原代巨噬细胞培养于RPMI 1640培养基中,加入LXR/RXR激动剂(4μg/ml 22R-OHC和10μmol/L 9-cis-RA)预处理6h,随后加入终浓度分别为0.625、1.25、2.5和5μM的亚砷酸钠(NaAsO2)处理18h;L-02肝细胞系及小鼠原代肝细胞培养于DMEM高糖培养基中,以2、4、6、8、16μM NaASO2处理48h。以LXR/RXR激动剂预处理6h,随后加入2.5μM NaAsO2处理THP-1细胞48h,随后在不含砷条件下继续培养48h,分别于12、24、36、42、48、60、72、84、96h内后收集细胞；12μM NaAsO2处理L-02细胞48h,随后在不含砷条件下继续培养48h,分别于12、24、36、42、48、60、72、84、96h内后收集细胞；。定量PCR (qPCR)以及蛋白印迹(Western blot)技术检测ABCA1、ABCG1和SR-BI基因表达水平；3H同位素示踪分析细胞内胆固醇流出率。结果：在THP-1巨噬细胞和小鼠原代巨噬细胞内,0.625μM及更高浓度NaAsO2可显著降低ABCA1 mRNA水平,1.25μM及更高浓度NaAsO2可显著降低ABCG1 mRNA水平,对SR-BI水平未见显著影响,ABCA1、ABCG1和SR-BI的蛋白表达水平的变化与基因水平一致,3H同位素示踪胆固醇,闪烁计数结果显示,在1.25μM及更高浓度NaAsO2可显著降低胆固醇流出率。在L-02细胞和小鼠原代肝细胞内,4μM及更高浓度NaAsO2可显著提升ABCA1 mRNA和ABCG1 mRNA水平,但对SR-BI水平没有显著性影响,ABCA1、ABCG1和SR-BI的蛋白表达水平的变化与基因水平一致,并且在8μM及更高浓度NaAsO2可显著提高胆固醇流出率。2.5μM NaAsO2处理THP-1巨噬细胞,在12h后THP-1巨噬细胞内ABCA1的表达有显著性降低,42h时ABCA1的表达达到最低值,降低了约60%,之后不再继续降低；去除砷24h后ABCA1的表达量开始增加,到36h后回复到初始水平。2.5μM NaAsO2处理THP-1巨噬细胞24h后胆固醇流出率显著降低,42h后到最低值,随后不再继续降低；去砷培养24h后胆固醇流出开始增加,到36h后恢复到初始水平。12μM NaAsO2处理L-02细胞,12h后L-02细胞内ABCA1的表达就有显著性的提升,36h时ABCA1的表达达到最高值,增加了约2.5倍,随后不再随时间延长也增加；去除砷12h后ABCA1的表达量开始降低,到36h后回复到初始水平。12μMNaAsO2处理L-02细胞24h后胆固醇流出显著增加,36小时达到峰值,随后不再增加；去砷培养12h后开始降低,24h恢复到初始水平。THP-1巨噬细胞和L-02细胞的胆固醇流出也具有与ABCA1基因表达一致的时效性。采用t检测法统计分析不同处理条件下基因表达水平及胆固醇流出率差异,P0.05具有显著性差异。结论：砷对胆固醇的流出及相关基因表达的影响具有组织特异性,以剂量-效应方式减少巨噬细胞胆固醇流出率及相关基因表达,但增加肝细胞胆固醇流出率及相关基因表达。
【学位授予单位】：杭州师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R543.5

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