β片层阻断肽H102对AD转基因小鼠脑内NF-κB信号通路相关蛋白的影响

发布时间：2017-11-16 14:21

  本文关键词：β片层阻断肽H102对AD转基因小鼠脑内NF-κB信号通路相关蛋白的影响

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【摘要】：目的:通过研究β片层阻断肽H102对APP/PS1双转基因AD模型小鼠脑内NF-κB通路相关蛋白和i NOS、cleaved caspase-3及BACE1蛋白活性及表达的影响,探究NF-κB通路在AD转基因模型小鼠脑内的变化及β片层阻断肽H102是否可能通过对NF-κB信号通路相关蛋白的影响来发挥对阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)的治疗作用。方法:选用8周龄APP/PS1双转基因雄性AD模型小鼠30只,随机分为模型组和给药组,每组15只;另选同周龄同背景的C57BL/6J雄性小鼠15只设为对照组。给药组小鼠每日经鼻腔给予H102溶液(5.8 mg/kg)5μl,对照组和模型组小鼠每日给予等量空白辅料溶液。给药16周后,采用Morris水迷宫检测小鼠的空间参考记忆的变化,主要包括定位航行实验和空间探索实验两个部分。行为学检测后,麻醉、灌注、冰上取脑,一侧的脑组织分离皮层和海马后于-80℃冻存。将另一侧脑组织放入4%多聚甲醛溶液内固定,之后进行蜡块包埋切片。采用免疫组织化学方法和免疫印迹技术测定小鼠脑组织内Aβ1-42、p-IKK、IKK、p-NF-κB、NF-κB、p-IκB、IκB、i NOS、cleaved caspase-3和BACE1蛋白的表达。结果:(1)Morris水迷宫测试定位航行实验:模型组逃避潜伏期均长于对照组,第2天起给药组小鼠的逃避潜伏期较模型组显著缩短(均P0.05),给药组除第1天和第4天外,与对照组小鼠的逃避潜伏期无显著性差异(P0.05)。空间探索实验:以目标象限停留时间、跨越隐形平台次数和中心活动时间作为分析小鼠记忆能力的指标。与对照组小鼠相比,模型组跨越隐形平台次数和目标象限停留时间以及中心活动时间显著低于对照组(均P0.05),给药组小鼠跨越隐形平台次数和目标象限停留时间以及中心活动时间显著高于模型组(均P0.05)。模型组小鼠的空间学习记忆能力较对照组显著降低,给药组较模型组显著提高(均P0.05)。(2)免疫组化及免疫印迹检测免疫组化染色结果:与对照组相比,模型组小鼠脑内Aβ1-42的染色较深,蛋白表达显著高于对照组(P0.05);与模型组相比,给药组小鼠脑内Aβ1-42的染色较浅,蛋白表达显著低于模型组(P0.05)。p-IKK、p-NF-κB和p-IκB蛋白存在于细胞胞浆和胞核,对照组胞内着色较浅,p-IKK、p-NF-κB和p-IκB蛋白累积光密度值较低;模型组胞内着色深,蛋白表达高于对照组,给药组胞内着色较浅,蛋白表达较模型组显著降低(均P0.05)。NF-κB蛋白存在于细胞胞核和胞浆内,在海马区对照组胞内着色较浅,NF-κB蛋白累积光密度值较低,模型组胞内着色深,蛋白表达高于对照组,给药组胞内着色较浅,蛋白表达较模型组显著降低(均P0.05);在皮层区三组染色差异无统计学意义(P0.05)。i NOS和cleaved caspase-3主要存在于胞浆,对照组胞浆着色较浅,i NOS和cleaved caspase-3蛋白累积光密度值较低;模型组胞浆着色深,蛋白表达高于对照组,给药组胞浆着色较浅,蛋白表达较模型组显著降低(均P0.05)。BACE1主要存在于胞膜,对照组胞膜着色较浅BACE1蛋白累积光密度较低;模型组胞膜着色深,蛋白表达高于对照组,给药组胞膜着色较浅,蛋白表达较模型组显著降低(均P0.05)。免疫印迹结果:与对照组相比,模型组小鼠脑内p-IKK、p-NF-κB、p-IκB、i NOS、cleaved caspase-3、BACE1和核内NF-κB蛋白表达均高于对照组(P0.01),给药组显著低于模型组(P0.05)。IKK总蛋白在三组小鼠脑内表达无显著性差异(P0.05);与对照组相比,模型组小鼠脑内IκB蛋白表达低于对照组(P0.05),给药组高于模型组(P0.05)。结论:在APP/PS1双转基因AD模型小鼠脑内NF-κB信号通路被过度激活;β片层阻断肽H102可抑制APP/PS1双转基因AD模型小鼠脑内NF-κB信号通路的过度激活,显著降低i NOS、cleaved caspase-3和BACE1的表达,明显改善APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R749.16

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本文编号：1192663