小鼠MSTN shRNA可控表达载体构建及基因沉默效率研究

发布时间：2017-11-18 12:11

  本文关键词：小鼠MSTN shRNA可控表达载体构建及基因沉默效率研究

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【摘要】：肌肉生成抑制素(MSTN)是肌肉发育的负调控因子。根据MSTN mRNA序列设计1对MSTN shRNA并构建整合型四环素诱导表达MSTN shRNA载体pSingle-tTS-MSTN shRNA-GFP。重组载体转染小鼠成肌细胞并经G418筛选,通过强力霉素(DOX)诱导细胞中MSTN shRNA表达,利用荧光显微镜观察细胞中GFP表达情况,利用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)及Western blot检测MSTN mRNA及蛋白的表达水平。结果表明:经DOX诱导后,转染含MSTN shRNA重组载体细胞组MSTN mRNA相对表达水平比未经DOX诱导组及其他对照组细胞中降低70%左右,差异极显著(P0.01),MSTN蛋白也下降90%左右,其他各组间MSTN mRNA及蛋白表达量差异不显著(P0.05)。该研究成功构建了可控表达MSTN shRNA载体,并在细胞水平证明其有很好的基因表达及调控效率,为后续制备可控表达MSTN shRNA转基因小鼠,通过精细调控MSTN基因的表达为研究该基因在肌肉发育中的功能奠定基础。
【作者单位】： 扬州大学兽医学院;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31101683、31272405) 江苏高校品牌专业建设工程项目(PPZY2015B158) 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心项目(2016-10)
【分类号】：Q786
【正文快照】： 基因表达调控是研究基因功能的重要手段。目的基因能否在表达系统中高效、可控表达是基因表达调控的关键。研究者在基因表达调控机制探究中,研发出一系列基因表达可控系统。其中,四环素诱导表达系统是近年来应用最广泛的一个可控表达系统[1],利用该系统成功制备出转基因小鼠、

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