睡美人转座子介导AEG1基因修饰的树突状细胞可治疗小鼠肝癌

发布时间：2017-11-22 04:03

  本文关键词：睡美人转座子介导AEG1基因修饰的树突状细胞可治疗小鼠肝癌

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【摘要】：目的 :探讨睡美人(Sleeping Bbeauty,SB)转座子系统转染树突状细胞(dendritic cells,DCs)的效率,以及星形胶质细胞上调基因1(astrocyte elevated gene 1,AEG 1)重组转座子系统转染DCs对小鼠肝癌的抑制作用。方法 :从p EGFP-N1质粒中获取巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fl uorescent protein,EGFP)基因,从小鼠肝癌细胞H22中克隆AEG1基因,将上述基因分别插入质粒p T/HB后获得重组转座子载体p T-CMV-EGFP和p T-CMV-AEG1。将重组转座子载体分别与转座酶p CMV-SB11按一定比例混合后获得双质粒转座子系统p T-CMV-EGFP/SB11和p T-CMV-AEG1/SB11。将p T-CMVEGFP/SB11转染DCs,荧光显微镜和FCM法观察EGFP表达率;将p T-CMV-AEG1/SB11转染DCs后,RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测AEG1 m RNA和蛋白的表达。用p T-CMV-AEG1/SB11转染后的DCs治疗肝癌H22细胞荷瘤小鼠,观察小鼠体内肿瘤体积的变化,并采用乳酸脱氢酶释放法检测治疗19 d后小鼠脾细胞对肝癌H22细胞的杀伤活性。结果 :经质粒酶切和基因测序证实,重组转座子载体p T-CMV-EGFP和pT-CMV-AEG1均构建成功。pT-CMV-EGFP/SB11转染DCs后24和48 h,细胞内EGFP的表达率分别为46.5%和27.8%,均明显高于空载体p TCMV/SB11转染组(P值均0.001)。p T-CMV-AEG1/SB11转染DCs后24 h,细胞内AEG1 m RNA和蛋白表达水平均高于空载体p T-CMV/SB11转染组(P值均0.001)。用p T-CMV-AEG1/SB11转染的DCs治疗H22荷瘤小鼠后,小鼠体内肿瘤生长被明显抑制(P0.01),小鼠脾细胞对肝癌H22细胞的杀伤活性明显增强(P0.01)。结论:SB转座子系统可高效转染DCs。p T-CMV-AEG1/SB11转染的DCs可通过诱导特异性细胞免疫,抑制H22细胞荷瘤小鼠的肿瘤生长。
【作者单位】： 昆明医科大学附属甘美医院(昆明市第一人民医院)生物医学实验中心;
【基金】：云南省应用基础研究-昆医联合专项(编号:2013FZ290)~~
【分类号】：R735.7
【正文快照】：

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本文编号：1213376