AtMYB32对AtGA20ox1基因表达的调控及在植物抗胁迫中的作用研究

发布时间：2017-11-23 02:03

  本文关键词：AtMYB32对AtGA20ox1基因表达的调控及在植物抗胁迫中的作用研究

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【摘要】：赤霉素(Gibberellin, GA)是一类重要的植物内源激素,它参与调节植物各个阶段的生长发育过程及对不同逆境胁迫的响应。本实验室在前期研究中通过酵母单杂交的方法筛选到与AtGA20ox1启动子结合的转录因子AtMYB32,并采用CPRG法定量分析测定了AtGA20ox1启动子与AtMYB32勺作用强度。为了进一步验证两者在植物体内的结合作用并研究转录因子AtMYB32的生物学功能,本论文开展了相关实验并获得以下结果：(1)筛选鉴定获得三个AtMYB32过表达株系：AtMYB32ox3、AtMYB32ox6和AtMYB32ox8;鉴定获得一个AtMYB32缺失突变体atmyb32-1。(2)成功构建p GreenⅡ 0800-LUC-pGA20ox1表达载体,通过双荧光素酶实验进一步证实AtMYB32与AtGA20ox1的启动子在植物体内结合,并抑制该基因的表达；通过染色质免疫共沉淀实验发现,转录因子AtMYB32与AtGA20ox1启动子上的MYB结合位点结合。(3)采用生物信息学方法分析了转录因子AtMYB32的基本理化性质、在细胞中的定位以及在不同组织部位中的表达,通过35S::AtMYB32-GFP农杆菌液注射烟草瞬时表达证实AtMYB32定位于细胞核中。采用实时荧光定量PCR技术分析AtMYB32在拟南芥不同组织器官中的表达,发现AtMYB32在各个组织中均有表达,其中在花与果荚中表达水平较高。对野生型拟南芥Co1-4幼苗浸泡250mM NaCl、300mM甘露醇(mannitol)进行胁迫处理或取其成熟莲座叶片进行干旱处理,检测AtMYB32基因的表达,结果表明AtMYB32的表达受NaCl、甘露醇及干旱处理的诱导,推测AtMYB32可能参与拟南芥的渗透胁迫过程。(4)分别测量统计过表达株系、缺失突变体株系及野生型在NaCl和甘露醇处理条件下的子叶变绿速率及主根根长,发现胁迫条件下过表达株系的子叶变绿速度比野生型快,主根比野生型长；而突变体则相反。(5)分别观察统计过表达株系、缺失突变体株系以及野生型在干旱处理前后植株的成活情况、不同浓度ABA处理时的气孔开度及叶片的失水率,发现与野生型相比,过表达株系的抗干旱能力增强,ABA处理时气孔闭合速度快,且在相同处理时间失水率比野生型低：而缺失突变体则相反。定量分析盐处理后过表达株系、缺失突变体株系以及野生型中渗透胁迫响应关键基因RD29A、RD29B的表达,发现过表达株系中RD29A、RD29B的表达量比野生型中高,缺失突变体则相反,表明AtMYB32在拟南芥抗渗透胁迫过程中起正向调节作用。
【学位授予单位】：湖南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：Q943.2
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本文编号：1216804