小鼠FABP4基因启动子驱动红色荧光蛋白载体的构建及在牛体细胞中的表达

发布时间：2017-11-24 08:27

  本文关键词：小鼠FABP4基因启动子驱动红色荧光蛋白载体的构建及在牛体细胞中的表达

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【摘要】：小鼠脂肪型脂肪酸结合蛋白(FABP4)的启动子/增强子元件是脂肪组织特异性启动元件,为了鉴定该元件在牛体细胞中的启动效果,首先以小鼠肝脏DNA为模板,通过PCR克隆得到5.9 kb的FABP4基因启动子片段,连入p MD19-T载体后进行酶切及测序鉴定,经Eco T 22I酶切去除非核心启动子区后精简为2.3 kb的片段,通过SacⅡ酶切将5.9 kb片段和2.3 kb片段的启动子连入红色荧光蛋白载体p Ds-Red 2-1的多克隆位点,构建为表达质粒p MF5.9-Red和p MF2.3-Red,利用脂质体法将上述载体分别转染牛脂肪间充质干细胞及牛胎儿成纤维细胞,24 h后实时定量PCR检测红色荧光蛋白转录水平。结果表明,克隆得到的5.9 kb小鼠FABP4启动子片段酶切及测序结果正确,与红色荧光蛋白载体相连的载体p MF5.9-Red和p MF2.3-Red酶切结果与预期相符,表达载体构建成功,实时定量PCR结果显示以上2种细胞在转染后24 h红色荧光蛋白均有表达,且p MF2.3-Red的转录水平是p MF5.9-Red的2倍以上。成功构建了小鼠FABP4启动子驱动红色荧光蛋白表达载体p MF5.9-Red和p MF2.3-Red,5.9 kb片段和2.3 kb片段均可驱动外源基因在牛体细胞中转录,且2.3 kb片段启动效率高于5.9 kb片段。
【作者单位】： 内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室;
【基金】：转基因生物新品种培育科技重大专项(2014ZX08010005)
【分类号】：Q78
【正文快照】： 用组织特异性启动子与增强子作为转录启始元件调控目的基因的表达,是动物基因工程中限定外源基因时空特异性表达常用的手段,在应用上比较成熟的如乳腺特异型(酪蛋白、乳球蛋白)、肌肉特异型(肌动蛋白、肌酸激酶、生肌因子家族)、肝脏特异型(TTR)、生殖细胞特异型(Oct-4)、毛囊

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