甲苯咪唑作用小林三代虫（Gyradactylus Kobayashii）差异表达基因的转录组分析

发布时间：2017-11-28 22:06

  本文关键词：甲苯咪唑作用小林三代虫（Gyradactylus Kobayashii）差异表达基因的转录组分析

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【摘要】：鱼类的三代虫病是三代虫属(Gyrodactylus)种类寄生在鱼体表、鳃部引起的一种常见病害,大量寄生导致寄主机体损伤、鳃呼吸困难,继而诱发细菌、病毒等病原微生物感染,往往给水产养殖业造成了很大危害和经济损失。甲苯咪唑是渔业生产中常见一种杀虫剂,对三代虫、指环虫等单殖吸虫引起的病害具有良好的作用。大量研究发现,较低浓度的甲苯咪唑对三代虫就有很好的杀灭效果,但是其作用机制尚不明确。对甲苯咪唑杀虫机制的研究,对今后抗虫渔药的研究和开发具有很好指导作用。本试验以寄生在金鱼的小林三代虫(Gyradactylus kobayashii)为研究对象,基于转录组测序和实时定量PCR技术,通过对三代虫药物处理、RNA的提取、转录组测序和验证分析基因表达变化,为进一步进行研究甲苯咪唑抗三代虫的分子机制提供基础资料。取得的主要结果为:1.转录组测序结果与数据分析:使用0.1 mg/L甲苯咪唑药浴感染小林三代虫的金鱼12h,采集小林三代虫并提取RNA,进行转录组测序。转录组测序结果为:经过数据分析得到差异显著基因(P0.05)有141个,从中筛去鱼类和细菌等非目的基因,得到了9个目的基因;结合基因功能筛选得到了7个目的基因,一共筛选出16个目的基因。2.筛选三代虫内参基因:从18S,5.8S,28S,β-Tubulin,Actin,GAPDH,UBC,COX1,ELF这9个内参基因中筛选。使用浓度0.05mg/L、0.1mg/L的甲苯咪唑药浴感染小林三代虫的金鱼,药浴的时间均为6 h和12 h,通过实时定量PCR和三个内参基因评价软件(geNorm,NormFinder和BestKeeper)对内参基因综合评价。结果表明:β-Tubulin是甲苯咪唑处理下小林三代虫稳定的内参基因。3.转录组测序结果的验证:使用浓度0.05mg/L、0.1mg/L的甲苯咪唑药浴感染小林三代虫的金鱼,药浴的时间均为6 h和12 h,通过实时定量PCR检测三代虫目的基因的表达情况。结果显示:在16个目的基因中,有8个基因有较高的表达量。其中有4个差异显著(P0.05)的基因表达量较高,且全部与转录组测序结果一致,使转录组测序的结果得到有效验证。有4个目的基因(TF002、TF004、TF005和TG004)在不同的浓度和时间的处理组之间显示出表达量变化上的规律性,推测与甲苯咪唑对小林三代虫的作用机制具有相关性。根据甲苯咪唑的作用机制,结合转录组测序数据和实时定量PCR数据,推测TF002和TF005与免疫系统过程相关,TF004与甲苯咪唑浓度正相关;TG004为α-甘露糖苷酶II,其所在的N—聚糖生物合成通路在甲苯咪唑处理下均出现表达上调,与甲苯咪唑的作用机制紧密相关。综上所述,α-甘露糖苷酶II可能与甲苯咪唑对小林三代虫的作用机制相关,研究结果为甲苯咪唑抗三代虫的分子机制提供理论基础。
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S941.5

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本文编号：1235132