改性魔芋葡甘露聚糖对齐口裂腹鱼免疫及相关基因表达的影响

发布时间：2017-12-03 03:27

本文关键词：改性魔芋葡甘露聚糖对齐口裂腹鱼免疫及相关基因表达的影响

【摘要】：为研究低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖(LOKGM)及氧化魔芋葡甘露聚糖硫酸酯(OKGMS)对齐口裂腹鱼生长、脏器指数、血清免疫及抗氧化指标及免疫相关基因表达的影响,为OKGMS及LOKGM在功能性食品中的应用提供理论依据,选取平均质量为81.00±2.48 g的健康齐口裂腹鱼420尾,随机分为7组,每组3个重复。基础组饲喂基础饲料,试验组在基础饲料中各组分别添加0.4% LOKGM、0.8% LOKGM、 1.6% LOKGM 及 0.4% OKGMS、0.8% OKGMS、1.6% OKGMS。饲喂60 d后,测定特定生长率、肥满度、中肾指数、头肾指数、肝体比、脾体指数、肠体指数和肠长指数；按照试剂盒说明书测定溶菌酶(LZM)、补体旁路途径溶血活性(ACH50)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、免疫球蛋白M (IgM)及丙二醛(MDA)含量；荧光定量PCR测定头肾、中肾、肠道、肝脏和脾脏中Toll样受体22(tlr22)、髓样分化因子88(myd88)、干扰素调节因子7(irf7)、1型干扰素(I-ifn)、转化生长因子β1 (tgf-β1)基因表达水平。研究结果如下：1.在生长及脏器指数方面,日粮添加不同剂量OKGMS 与 LOKGM对齐口裂腹鱼特定生长率、肥满度、中肾指数、头肾指数、肝脏指数、肠体指数、肠长指数均无显著影响(p0.05), OKGMS1.6组显著提高齐口裂腹鱼脾体指数(p0.05)。2.在血清抗氧化指标方面,OKGMS与LOKGM均能提高血清SOD活性,且OKGMS各剂量组均达到显著水平；与对照组相比,OKGMS0.4、OKGMS0.8、LOKGM0.4、 LOKGM0.8组均能显著降低齐口裂腹鱼血清MDA的含量(p0.05),说明OKGMS与LOKGM对血清MDA的含量有一定的影响；LOKGM0.8、LOKGM1.6组血清中GSH-Px含量显著高于对照组(p0.05),其他组均无显著影响。3.在血清免疫指标方面,与对照组相比,OKGMS1.6组能显著提高齐口裂腹鱼血清IgM活性与ACH50含量(p0.05),其他剂量组均可提高血清IgM含量,但未达到显著水平；OKGMS1.6与OKGM0.8组能显著提高齐口裂腹鱼血清中LSZ含量(p0.05)。4.在引物设计及验证方面,参照NCBI鲤鱼、斑马鱼、草鱼等鲤科鱼免疫相关基因序列设计引物,成功克隆得到tl r22、myd88、irf7、I-ifn 和tgf-β1的基因片段,分别为174bp、125bp、142bp、192bp和190bp,分别编码58、41、47、64和63个氨基酸。从氨基酸序列比对结果及进化树分析来看,tlr22、myd88、irf7、I-ifn 与 tgf-β1基因与鲤科鱼氨基酸序列相似度较高,亲缘关系也较近。5.在免疫相关基因表达方面,OKGMS能显著提高头肾、中肾、肠道、肝脏中thr22基因相对表达量(p0.05),对脾脏tlr22表达量无显著影响(p0.05), LOKGM能显著上调对头肾、中肾、肠道、肝脏、脾脏各组织中tlr22基因相对表达量(p0.05)；OKGMS能显著上调中肾、肠道、肝脏中myd88基因相对表达量(p0.05),对头肾和脾脏myd88基因相对表达量无显著影响(p0.05), LOKGM能显著提高头肾、肠道中myd88基因相对表达量(p0.05)；对中肾、肝脏、脾脏中myd88基因相对表达量无显著影响(p0.05); OKGMS显著提高齐口裂腹鱼中肾、肝脏、脾脏中irf7基因相对表达量影响显著(p0.05)对头肾和肠道中irf7基因相对表达量影响不显著(p0.05), LOKGM能显著提高齐口裂腹鱼肠道、肝脏、脾脏中irf7基因相对表达量(p0.05),对头肾和中肾中irf7基因相对表达量无显著影响(p0.05); OKGMS对齐口裂腹鱼头肾I-ifn基因相对表达量无显著影响(p0.05),显著上调中肾、肠道、肝脏、脾脏中I-ifn基因相对表达量(p0.05), LOKGM能显著提高齐口裂腹鱼中肾、肠道、脾脏中I-ifn基因相对表达量(p0.05),对头肾和肝脏中I-ifn基因相对表达量无显著影响(p0.05); OKGMS显著下调头肾、肠道、肝脏中tgf-/β1基因相对表达量(p0.05),对中肾、脾脏中tgf-β1基因相对表达量无显著影响(p0.05), LOKGM显著下调齐口裂腹鱼头肾、中肾、肝脏中tgf-β1基因相对表达量(p0.05),对肠道、脾脏中tgf-β1基因相对表达量无显著影响(p0.05)。因此,我们得出如下结论：日粮中添加一定剂量OKGMS及LOKGM寸齐口裂腹鱼生长及脏器指数影响较小,仅OKGMS1.6组显著提高齐口裂腹鱼脾体指数;OKGMS对齐口裂腹鱼血清SOD活性影响显著；与对照组相比,OKGMS及LOKGM低剂量和中剂量均能显著降低齐口裂腹鱼血清MDA的含量；LOKGM0.8、LOKGM1.6对血清中GSH-Px含量影响显著；日粮中添加OKGMS和LOKGM会上调齐口裂腹鱼tlr22、myd88、irf7、I-ifn基因在头肾、中肾、肠道、肝脏和脾脏中的表达,下调组织中tgf-β1的相对表达量,其中LOKGM0.8与OKGMS0.4最为显著。
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S917.4

【参考文献】

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