茶树丙氨酸氨基转移酶基因的克隆与表达分析

发布时间：2017-12-04 12:03

  本文关键词：茶树丙氨酸氨基转移酶基因的克隆与表达分析

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【摘要】：丙氨酸氨基转移酶(Alanine Aminotransferase,Ala AT)是与碳氮代谢相关的一种重要酶类。采用反转录PCR的方法克隆了茶树Cs Ala AT1的c DNA序列,该序列全长1 747 bp,包含一个完整的ORF(1 626 bp),编码541个氨基酸,推导的蛋白质分子量为59.4 k D,理论等电点(p I)为5.82。同源比对结果表明,Cs Ala AT1含有丙氨酸氨基转移酶亚家族保守的辅酶磷酸吡哆醛结合位点,其氨基酸序列与拟南芥At Ala AT1蛋白的相似性为84%。二级结构预测显示该蛋白由α-螺旋(40.67%)、无规则卷曲(29.57%)、β-折叠(13.68%)和延伸链(16.08%)组成,定位于线粒体,不含信号肽与跨膜结构。实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测发现Cs Ala AT1在茶树各组织中均有表达,在根中的表达量最高;Cs Ala AT1基因表达对氮素的响应研究表明,成熟叶中Cs Ala AT1受氮素诱导上调表达,高浓度(1 mmol·L-1 NH4NO3)氮素的诱导效应比低浓度(0.1 mmol·L-1 NH4NO3)氮素诱导效应更强烈;在根中,处理24 h后,高氮诱导Cs Ala AT1上调表达,低氮诱导Cs Ala AT1下调表达。
【作者单位】： 中国农业科学院茶叶研究所/国家茶树改良中心/农业部茶树生物学与资源利用重点实验室;中国农业科学院研究生院;
【基金】：国家自然科学基金(31570695) 国家现代农业产业技术体系(nycytx-23) 浙江省农业新品种选育重点专项(2012C2905-4)
【分类号】：S571.1;Q943.2
【正文快照】： 氮素是植物生长发育过程中需求量最大的矿质元素,氮素供应不足会严重影响农作物的产量。为了保证产量,在现代农业生产过程中往往施用大量氮肥。但是大多数农作物对氮肥的利用率只有三分之一,其余因流失而造成环境污染[1]。因此借助基因工程手段培育氮高效利用品种,成为降低氮

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本文编号：1250904