阿尔茨海默病患者外周血T淋巴细胞高表达CXCR2受体在其穿越血脑屏障过程中的

  本文关键词：电针对淀粉样前体蛋白转基因小鼠海马微血管淀粉样沉积的影响及其与低密度脂蛋白相关受体1的关系，由笔耕文化传播整理发布。

《中国医科大学》 2008年

阿尔茨海默病患者外周血T淋巴细胞高表达CXCR2受体在其穿越血脑屏障过程中的作用机制研究

刘怿君  

【摘要】： 目的 血脑屏障由脑微血管内皮细胞,基底膜和星型胶质细胞的足突构成,能够阻隔大分子物质自由通过。由于具有血脑屏障,并且缺乏淋巴管,中枢神经系统长期以来被认为是一个免疫豁免器官,不被免疫系统所监视。然而,近年的研究表明,CNS在生理状态下同样有免疫细胞的时常“光临”,免疫细胞具有穿过血脑屏障的能力。 阿尔茨海默病是引起老年人群痴呆的最常见原因,并随着人类寿命的延长,发病率呈明显增高趋势,患者通常在发病后5-6年内死于继发感染和全身衰竭。 AD的发病机制中,脑内淀粉样蛋白沉积与斑块形成具有重要作用,也是AD最显著的病理特征。近年研究表明,炎症在AD发病中起着至关重要的作用。AD患者脑实质内存在Aβ反应性T淋巴细胞,其数量与同年龄对照组相比,具有显著的统计学意义。但外周血T淋巴细胞是如何活化并穿越血脑屏障进入脑实质内的,目前尚不清楚。 本研究室陈誉华课题组发现AD病人外周血T淋巴细胞穿过血脑屏障体外模型能力显著高于同龄对照人群。使用基因芯片对AD患者外周血T淋巴细胞分析结果表明其CXCR2受体表达明显增高。但CXCR2受体在T淋巴细胞跨血脑屏障过程中发挥着怎样的作用,目前仍不清楚。 CXCR2受体是细胞因子受体家族的重要一员,与其配体IL-8作用能够趋化淋巴细胞、单核巨噬细胞以及中性粒细胞等炎症细胞发生体内外的迁移。本研究旨在通过模拟AD患者体内微环境,对Aβ沉积、T细胞高表达CXCR2,T细胞迁移入脑之间的关系做以研究和阐述。 方法 1、探讨AD患者外周血T淋巴细胞高表达CXCR2与其跨内皮迁移能力之间的关系 (1)Real-time PCR检测AD患者外周血T淋巴细胞CXCR2受体表达水平。 (2)构建含有BV2小胶质细胞的体外血脑屏障模型,模拟AD脑微环境对AD患者外周血T淋巴细胞及Jurkat、6T-CEM淋巴细胞系进行迁移分析,并使用CXCR2中和抗体进行抗体封闭实验。 2、探讨Aβ反应性小胶质细胞引起的脑微血管内皮细胞IL-8表达上调在T淋巴细胞跨内皮迁移过程中的作用 (1)使用Aβ刺激的BV2培养上清作用HBMECs后,使用Real-time PCR、ELISA检测IL-8水平。 (2)使用IL-8中和抗体及siRNA干扰HBMECs IL-8,对AD患者T淋巴细胞及Jurkat进行迁移分析及黏附分析。 (3)构建Aβ_(1-42)脑内沉积动物模型,Real-time PCR检测外周血T淋巴细胞CXCR2水平,免疫荧光检测脑微血管内皮细胞CINC-1(大鼠IL-8)表达情况。 (4)给予Aβ_(1-42)脑内沉积模型大鼠腹腔注射CXCR2拮抗剂SB332235-Z,制作脑冰冻切片,免疫荧光检测T淋巴细胞数。 3、探讨Aβ反应性小胶质细胞TNF-α在CXCR2/IL-8介导的T细胞跨内皮迁移过程中的作用 (1)ELISA检测Aβ作用的BV2及U937培养上清中了NF-α水平。 (2)使用TNF-α中和抗体处理经Aβ刺激的BV2上清,作用HBMECs后,ELISA检测IL-8水平。 (3)在rhTNF-α及Aβ反应性的BV2介导的黏附和迁移实验中,使用CXCR2、IL-8及了NF-α中和抗体进行封闭实验。 (4)构建Aβ_(1-42)脑内沉积动物模型,脑室内注射TNF-α拮抗剂Enbrel,Real-time PCR检测外周血T淋巴细胞CXCR2水平,免疫荧光检测脑微血管内皮细胞CINC-1表达情况以及脑切片T淋巴细胞数。 结果 1、AD患者外周血T淋巴细胞高表达CXCR2增强其穿过HBMEC单层能力 (1)AD患者外周血T淋巴细胞CXCR2受体表达水平升高。 (2)CXCR2中和抗体能够有效抑制T淋巴细胞跨内皮迁移。 2、Aβ反应性小胶质细胞上调脑微血管内皮细胞IL-8表达,有助于CXCR2/IL-8介导的T淋巴细胞跨内皮迁移 (1)Aβ刺激的BV2培养上清刺激可上调HBMECs IL-8表达水平。 (2)使用IL-8中和抗体及siRNA干扰HBMECs IL-8,能够抑制AD患者T淋巴细胞及Jurkat CXCR2/IL-8依赖的迁移及黏附。 (3)脑内沉积的模型动物中Aβ_(1-42)沉积能够诱导外周血T淋巴细胞CXCR2和脑微血管内皮细胞上CINC-1表达升高,最终引起外周血T细胞CXCR2依赖性穿过血脑屏障。 3、Aβ反应性小胶质细胞TNF-α能够诱导T细胞CXCR2/IL-8介导的跨内皮迁移 (1)Aβ_(1-42)可上调小胶质细胞TNF-α表达,并引起HBMECs IL-8表达增加。 (2)TNF-α中和抗体能够抑制Aβ_(1-42)反应性小胶质细胞介导的T淋巴细胞迁移;TNF-α引发的T淋巴细胞迁移可被CXCR2或IL-8中和抗体拮抗。 (3)TNF-α拮抗剂Enbrel可下降脑内Aβ_(1-42)脑内沉积大鼠外周血T淋巴细胞CXCR2及脑微血管内皮细胞CINC-1表达,并抑制T淋巴细胞的跨血脑屏障迁移。 结论 AD患者脑内Aβ沉积刺激小胶质细胞产生TNF-α,并通过TNF-α促进脑微血管内皮细胞IL-8分泌及外周血T淋巴细胞CXCR2表达。T淋巴细胞通过高表达的CXCR2受体与脑微血管内皮细胞IL-8相作用,增强T淋巴细胞与脑微血管内皮细胞的黏附,进而促进T淋巴细胞穿过血脑屏障。

【关键词】：
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R749.16
【目录】：

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