家蚕杆状病毒bro-d基因缺失对病毒基因转录和细胞凋亡的影响

发布时间：2017-12-05 02:19

  本文关键词：家蚕杆状病毒bro-d基因缺失对病毒基因转录和细胞凋亡的影响

  更多相关文章： 家蚕核型多角体病毒(BmNPV) bro-d 基因敲除 转录 细胞凋亡

【摘要】：家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm NPV)bro(baculovirus repeated ORF)-d基因普遍存在于多种感染鳞翅目昆虫的多角体病毒基因组中,是杆状病毒中一类重复开放阅读框序列。为了解bro-d基因在病毒感染过程中的作用及其与宿主细胞凋亡之间的关系,本研究利用Red重组技术敲除Bm NPV基因组中的bro-d基因,构建基因缺失型病毒bro-d-ko-Bacmid,并将该缺失型病毒转染家蚕Bm N细胞,利用q RT-PCR技术检测bro-d基因的缺失对病毒基因组复制、转录水平以及抑制凋亡蛋白2基因(inhibitor of apoptosis protein 2,iap2)的影响。结果显示,bro-d基因缺失后会导致病毒基因组的复制水平显著下降(P0.05),同时病毒的早期基因lef-3、晚期基因vp39和极晚期基因p10的转录水平也都显著下降(P0.05);iap2的转录水平显著下调(P0.05)。在bro-d基因缺失型病毒的复制水平明显低于野生型病毒的情况下,仍会导致细胞活力显著下降(P0.05);bro-d基因缺失引起细胞B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白含量明显低于野生型病毒,而Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 assaciated X protein,Bax)含量显著高于野生型病毒(P0.05),进而导致细胞凋亡水平上升。结果表明,bro-d基因不仅对病毒各时期基因表达水平具有调控作用,也可通过调控iap2的表达进而调控宿主细胞的凋亡水平。研究成果为深入了解bro-d基因在病毒感染过程中的功能提供了基础资料,也为通过延长宿主细胞寿命、提高目的蛋白表达产量来进行杆状病毒表达载体的改造提供了新思路。
【作者单位】： 浙江理工大学生命科学学院/浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室;
【基金】：国家高技术研究发展计划(863)项目(No.2011AA100603) 浙江理工大学521人才培养计划
【分类号】：Q939.4
【正文快照】： 昆虫杆状病毒是一类专性寄生于鳞翅目昆虫且家族成员庞大的DNA病毒。2008年的主要病毒名录中昆虫杆状病毒分为4个属:α、β、δ和γ杆状病毒属,其中α杆状病毒属包含了核型多角体病毒属(Nucleopolyhedrovirus,NPV)(景天忠等,2011)。苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa cal

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