砀山酥梨肉桂酸4-羟化酶基因的克隆及表达分析

发布时间：2017-12-05 11:22

  本文关键词：砀山酥梨肉桂酸4-羟化酶基因的克隆及表达分析

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【摘要】：木质素是梨(Pyrus)石细胞的重要成分之一,木质素合成代谢对石细胞形成发育有着重要影响。肉桂酸4-羟化酶(cinnamate 4-hydroxylase,C4H,EC 1.14.13.11)是细胞色素单加氧酶超家族中CYP73A亚家族的一员,同时为木质素合成代谢中的一个关键酶。本研究从砀山酥梨(Pyrus bretschneideri cv.Danshan Su)果实中克隆出一条肉桂酸4-羟化酶基因的全长c DNA序列,命名为Pb C4H,Gen Bank登录号为:KF663548。Pb C4H全长1 764 bp,具有1 515 bp的ORF,编码504个氨基酸。Pb C4H与多个物种C4H基因编码的氨基酸序列具有较高的同源性,说明其在进化过程中较为保守。结构域分析表明,Pb C4H具有跨膜结构域和典型的细胞色素P450结构域特征。q RT-PCR分析发现在梨果实发育的不同时期,Pb C4H基因表达量呈现先增加后下降的趋势,其中在花后55 d达到最高。构建了Pb C4H原核表达载体p ET-32aPb C4H,在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21菌株中诱导表达出Pb C4H融合蛋白。亚细胞定位表明Pb C4H蛋白定位于细胞膜上。本研究结果为利用分子生物学技术调控梨木质素的合成和石细胞的发育提供了基础资料。
【作者单位】： 安徽农业大学生命科学学院;安徽省农业科学院园艺研究所;
【基金】：国家自然科学基金(No.30771483;No.31171944和No.31640068) 安徽农业大学大学生科技创新基金(No.XJ2015258)
【分类号】：S661.2
【正文快照】： *同等贡献作者砀山酥梨(Pyrus bretschneideri cv.Dangshan Su)是我国四大名梨之一,产于安徽省砀山县,属白梨系品种,因其甘甜酥脆、营养丰富,还有去热清痰止咳润肺等药用价值,驰名海内外。梨果实石细胞团的大小及密度对其内在品质有着重要影响,目前研究表明,石细胞是由于薄壁

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